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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切问题
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yydr

新虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切问题 已有6人参与

为什么我的pet载体与目的片段经双酶切后与目的片段连接，竟然是空载体？双酶切后不是不容易出现空载吗

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-05-28 15:46:43
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很明显自连是载体上只切了一刀，另一刀没及时切上所致。
建议:
1 把两个酶的说明书拿出来看看分析一下相应buffer下哪个酶效率低一些可适当增加酶量，同时适当延长切割时间。
2 在你们实验室找一找有没有已经在你那两个酶切位点中间成功连上其他基因的重组质粒，直接借过来双酶切割胶回收即可得到两端粘性末端的质粒

[ 发自小木虫客户端 ]
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yydr yydr
大家相互帮助哈
13楼2015-05-30 01:02:25
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a13515517892

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-05-28 20:58:39
双酶切也会有酶切不完全的情况，出现空载体也是有可能的，建议你酶切的量稍微少点，然后酶切的时间稍微啦长点，再切胶回收。
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2楼2015-05-28 15:55:04
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2015-05-28 20:58:47
酶切不完全导致的，这是完全可能的。
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3楼2015-05-28 17:01:41
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yydr

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by a13515517892 at 2015-05-28 15:55:04
双酶切也会有酶切不完全的情况，出现空载体也是有可能的，建议你酶切的量稍微少点，然后酶切的时间稍微啦长点，再切胶回收。

量少容易回收回来的太暗啊，

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2015-05-28 22:08:09
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