| 查看: 11290 | 回复: 4 | |||
lvbobo823铁杆木虫 (正式写手)
|
[求助]
GUS染色问题 已有2人参与
|
|
各位虫友们： 最近做小麦花穗的GUS瞬时表达，发现各组织都被染上。 具体做法是取小麦幼穗分别剥取花药，花粉，内稃，萼片等在高渗培养基上处理4小时后进行基因枪轰击，先轰击只含金粉的对照，再分别轰击含有目的片段的质粒。两天后进行染色，发现不管对照还是含有目的载体的雌蕊都染成蓝色，其他组织部分染上色。我用的启动子是雌蕊特异表达的。 GUS染液成分（50 mM Na2HPO4, 30 mM NaH2PO4, 0.4 mM K3[Fe(CN6)], 0.4 mM K4[Fe(CN6)], 8 mM EDTA, 0.5% Triton X-100, 20% 甲醇, 1mg/ml X-gluc）样品37度过夜孵育，70%酒精脱色2-3次后观察。 希望各虫友帮忙解决一下染色不特异情况，另外问一下小麦GUS染色有没有别的特殊要求？应该怎样做，望各位大神不吝指教，不胜感激。 注：GUS基因对比是跟pGWB3一致。再一个我发现只要材料有损伤的地方容易被染上色。 谢谢各位虫友帮忙！这问题困扰我老长时间了。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 虫友问答-分子生物 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有13人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 基因表达定位，现在是用GUS好还是GFP好？
已经有8人回复
- 免疫荧光染色固定几天后在染色可以不？
已经有7人回复
- 革兰氏镜检蓝色怎么回事
已经有15人回复
- 【急】！考马斯亮蓝的染色问题
已经有11人回复
- 毛状根培养问题
已经有10人回复
- 关于TEM染色的问题
已经有15人回复
- GUS染色求助！
已经有4人回复
- GUS染色染不上的原因
已经有10人回复
- 原位杂交 与 gus 染色 需不需要都做
已经有8人回复
- 新手请教，染色液染不上色都是什么原因啊？
已经有5人回复
- gus染色 中gus农杆菌能染成蓝色吗？
已经有6人回复
- 变性PAGE跑DNA，请问是用什么染色？EB还是银染？
已经有8人回复
- NaH2PO4缓冲液配置求助
已经有10人回复
- 关于心肌TTC染色问题
已经有8人回复
- 0.5M的EDTA钠盐用水无法溶解怎么回事？
已经有18人回复
- 构建植物表达载体pBI121带着GUS有木有影响啊
已经有9人回复
- 现代植物生理学实验指南（中国科学院上海植物生理研究所 上海市植物生理学会 编）
已经有185人回复
- 拟南芥启动子GUS染色空载体能染上！无解
已经有3人回复
- 【求助/交流】有没有人做过拟南芥胚胎的GUS染色的，是先剥离胚胎还是连果荚一起染？
已经有6人回复
- 【求助/交流】35S::GUS 拟南芥种子
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于GUS染色
已经有3人回复
- 【求助/交流】dab染色
已经有17人回复
- 【求助/交流】构建GUS载体的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教各位一个关于启动子的问题
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于GUS染色
已经有17人回复
- 【求助/交流】关于T0，T1，T2代问题
已经有5人回复
- 【求助】怎样对材料上的细胞做荧光染色
已经有7人回复
2楼2016-06-01 00:42:03
wxf8470
木虫 (小有名气)
- 应助: 15 (小学生)
- 金币: 1437.5
- 散金: 100
- 帖子: 195
- 在线: 200.7小时
- 虫号: 869514
- 注册: 2009-10-12
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lvbobo823: 金币+20, ★★★很有帮助, 方法说明很详细，帮助很大 2016-10-28 14:06:29
lvbobo823: 金币+20, ★★★很有帮助, 方法说明很详细，帮助很大 2016-10-28 14:06:29
|
检测过不轰击的吗?另外能找到阳性对照吗? 最简单的是换GUS染色方法, 以下是我用过的，很好用，阴性对照没出现过。 转基因烟草叶片剪碎，经90％丙酮冰浴30 min，室温下1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)（配方后附）洗两次，每次15 min，之后加入GUS组织化学染色反应液（配方后附），37℃避光温育24 h。倒掉反应液，70％乙醇4℃固定几小时，95%乙醇脱色，照相。 1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2)(1000 mL)： NaH2PO4 38.9 g Na2HPO4 258.12 g 调pH值到7.2，ddH2O定容至1000 mL，121℃灭菌20 min。 0.2 mol/L NaH2PO4 (pH7.0) (100 mL)： 3.12 g NaH2PO4•2H2O溶于灭菌ddH2O中，定容至100 mL 0.2 mol/L Na2HPO4 (pH7.0) (100 mL)： 7.17 g NaH2PO4•12H2O溶于灭菌ddH2O中，定容至100 mL GUS组织化学染色反应液(20 mL)： 0.2 mol/L NaH2PO4 (pH7.0) 5mL 0.2 mol/L Na2HPO4 (pH7.0) 5mL EDTA (0.5 mol/L ，pH8.0) 5mL Tween-20 80μL K3[Fe(CN)6] (170 mmol/L) 118μL K4[Fe(CN)6] (170 mmol/L) 118μL X-Gluc (20mg/mL) 1mL 加ddH2O定容至20 mL，分装后-20℃贮存。 |
3楼2016-06-01 03:03:18
snhajn
新虫 (著名写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2292.3
- 散金: 1151
- 红花: 17
- 沙发: 2
- 帖子: 1730
- 在线: 132小时
- 虫号: 3013614
- 注册: 2014-03-03
- 性别: MM
- 专业: 食品科学基础
4楼2016-08-08 14:10:46
5楼2017-01-10 14:45:38
