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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » TA克隆问题
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yydr

新虫 (初入文坛)

[求助] TA克隆问题 已有3人参与

为什么我回收的片段没有杂带，最后连上载体以后跑胶看不是空载，用pcr扩增目的片段却不是我的目的片段大小呢？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2015-05-16 17:00:15
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随风追梦

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-18 23:08:50
你说你“回收的片段没有杂带”，如果这么自信干嘛不直接测序？
如果能够故排除载体的问题，那么就是你PCR产物到胶回收这两个过程的问题……
个人认为，连接载体都比较傻也就是忠实度都比较高，认为你PCR及胶回收这两步出问题的可能性比较大……重新设计引物，或者如果有必要做巢式PCR……
如有不当请见谅……
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初心不改！
11楼2015-05-18 20:51:01
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cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
挑了几个转化子？是不是在电泳或者回收时污染了其它含有A尾巴的DNA片段了？
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yydr
2楼2015-05-16 19:14:49
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yydr

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cuihao102 at 2015-05-16 19:14:49
挑了几个转化子？是不是在电泳或者回收时污染了其它含有A尾巴的DNA片段了？

可是我跑胶回收后条带很单一啊

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2015-05-16 21:29:11
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cuihao102

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-05-18 23:08:02
引用回帖:
3楼: Originally posted by yydr at 2015-05-16 21:29:11
可是我跑胶回收后条带很单一啊
...

所谓污染不一定达到能看见的量，如果运气比较差的话只有一点其它DNA就有可能给连上了，就被你挑到了！所以推荐你多挑些转化子去验一下！

[ 发自小木虫客户端 ]
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yydr
4楼2015-05-16 21:46:46
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