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zoemeig

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[求助] MTT做不出来，麻烦大家帮我分析一下，先谢过啦~ 已有1人参与

首先贴下我的实验步骤：
1. 细胞铺板：人肺纤维化细胞HLF，第8代细胞，96孔板中按每孔2000个细胞铺板（100ul），过夜贴壁；
2. 用含0.1% FBS的DMEM培养基饥饿处理24h；
3. 加药：按附件表格中的浓度加药（药物先溶于100ul步骤2中的培养基中再加入到96孔板中），其中第1、2孔不加，孵育30min；
4. PDGF-BB刺激：加药30min后，加20ng/ml PDGF-BB（1ug/ml, 4ul）刺激细胞增殖48h，其中第1孔不加；
5. 测MTT：48h后，加入20ul 5mg/ml MTT（PBS）溶液，孵育4h后，吸走培养基，加入100ul DMSO，振荡器振荡10min，检测在570nm处的吸光值。
结果是空白组的培养条件为含0.1% FBS的DMEM，培养3天后MTT检测值接近0.9，与加刺激组相近。
预计的结果应该是空白组很低，不知道这是为什么？
总觉得是这株细胞的问题，似乎长太快了。
不知道有没有人做过相关的实验，或者养过人肺成纤维细胞，麻烦帮我看看这株细胞有没有什么问题呢？
谢谢各位啦~

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1楼 2015-05-15 22:12:14

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孤鸿一叶

金虫 (小有名气)

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你这个加刺激增殖应该作用不大。。。或许是加入药物后培养48h 时间过长了

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你不需要强势，只需有在家人，朋友需要你的时候有力挽狂澜的能力。。。

9楼2015-05-19 07:41:46

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dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)

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【答案】应助回帖

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zoemeig: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-05-22 10:11:54
zoemeig: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-22 10:12:40

空白组可能OD值相对过高，楼主可以尝试适当降低细胞密度，这类细胞生长比较旺盛。

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2楼2015-05-16 11:27:00

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