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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » MTT做不出来，麻烦大家帮我分析一下，先谢过啦~
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zoemeig

金虫 (小有名气)

[求助] MTT做不出来，麻烦大家帮我分析一下，先谢过啦~ 已有1人参与

首先贴下我的实验步骤：
1. 细胞铺板：人肺纤维化细胞HLF，第8代细胞，96孔板中按每孔2000个细胞铺板（100ul），过夜贴壁；
2. 用含0.1% FBS的DMEM培养基饥饿处理24h；
3. 加药：按附件表格中的浓度加药（药物先溶于100ul步骤2中的培养基中再加入到96孔板中），其中第1、2孔不加，孵育30min；
4. PDGF-BB刺激：加药30min后，加20ng/ml PDGF-BB（1ug/ml, 4ul）刺激细胞增殖48h，其中第1孔不加；
5. 测MTT：48h后，加入20ul 5mg/ml MTT（PBS）溶液，孵育4h后，吸走培养基，加入100ul DMSO，振荡器振荡10min，检测在570nm处的吸光值。
结果是空白组的培养条件为含0.1% FBS的DMEM，培养3天后MTT检测值接近0.9，与加刺激组相近。
预计的结果应该是空白组很低，不知道这是为什么？
总觉得是这株细胞的问题，似乎长太快了。
不知道有没有人做过相关的实验，或者养过人肺成纤维细胞，麻烦帮我看看这株细胞有没有什么问题呢？
谢谢各位啦~

MTT做不出来，麻烦大家帮我分析一下，先谢过啦~
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MTT做不出来，麻烦大家帮我分析一下，先谢过啦~-1
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MTT做不出来，麻烦大家帮我分析一下，先谢过啦~-2
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1楼 2015-05-15 22:12:14
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

孤鸿一叶

金虫 (小有名气)
你这个加刺激增殖应该作用不大。。。或许是加入药物后培养48h 时间过长了
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你不需要强势，只需有在家人，朋友需要你的时候有力挽狂澜的能力。。。
9楼2015-05-19 07:41:46
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普通回帖

dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2015-05-16 13:38:32
zoemeig: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-05-22 10:11:54
zoemeig: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-22 10:12:40
空白组可能OD值相对过高，楼主可以尝试适当降低细胞密度，这类细胞生长比较旺盛。
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2楼2015-05-16 11:27:00
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zoemeig

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dengxin6366 at 2015-05-16 11:27:00
空白组可能OD值相对过高，楼主可以尝试适当降低细胞密度，这类细胞生长比较旺盛。

你好~我试了8000个细胞每孔和2000个细胞每孔，结果是空白组OD值都很高
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3楼2015-05-16 12:32:09
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dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zoemeig at 2015-05-16 12:32:09
你好~我试了8000个细胞每孔和2000个细胞每孔，结果是空白组OD值都很高...

你可以试试1000，还有个方法，DMSO加200uL试试
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4楼2015-05-16 16:07:17
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zoemeig

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dengxin6366 at 2015-05-16 16:07:17
你可以试试1000，还有个方法，DMSO加200uL试试...

好的，我试试。
请问你有没有养过肺成纤维细胞啊？我这细胞形态正常吗？有人说我的细胞可能分化了，而且我感觉细胞长的越来越大了。
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5楼2015-05-16 16:30:57
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dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zoemeig at 2015-05-16 16:30:57
好的，我试试。
请问你有没有养过肺成纤维细胞啊？我这细胞形态正常吗？有人说我的细胞可能分化了，而且我感觉细胞长的越来越大了。...

我只养过HPF
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6楼2015-05-16 19:10:08
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zoemeig

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dengxin6366 at 2015-05-16 19:10:08
我只养过HPF...

HPF细胞你做过MTT吗？实验过程有什么需要特别注意的吗？
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7楼2015-05-18 14:35:34
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dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zoemeig at 2015-05-18 14:35:34
HPF细胞你做过MTT吗？实验过程有什么需要特别注意的吗？...

只做过一次，所以也不能给你太多的建议。
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8楼2015-05-18 18:03:30
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zoemeig

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 孤鸿一叶 at 2015-05-19 07:41:46
你这个加刺激增殖应该作用不大。。。或许是加入药物后培养48h 时间过长了

我在想会不会是用来刺激的PDGF-BB出了问题，不知道是不是没稀释好。
还有一个问题就是空白值也异常的高，这个很不正常。
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10楼2015-05-21 15:49:48
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