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zoemeig

金虫 (小有名气)

[求助] MTT做不出来,麻烦大家帮我分析一下,先谢过啦~ 已有1人参与

首先贴下我的实验步骤:
1. 细胞铺板:人肺纤维化细胞HLF,第8代细胞,96孔板中按每孔2000个细胞铺板(100ul),过夜贴壁;
2. 用含0.1% FBS的DMEM培养基饥饿处理24h;
3. 加药:按附件表格中的浓度加药(药物先溶于100ul步骤2中的培养基中再加入到96孔板中),其中第1、2孔不加,孵育30min;
4. PDGF-BB刺激:加药30min后,加20ng/ml PDGF-BB(1ug/ml, 4ul)刺激细胞增殖48h,其中第1孔不加;
5. 测MTT:48h后,加入20ul 5mg/ml MTT(PBS)溶液,孵育4h后,吸走培养基,加入100ul DMSO,振荡器振荡10min,检测在570nm处的吸光值。
结果是空白组的培养条件为含0.1% FBS的DMEM,培养3天后MTT检测值接近0.9,与加刺激组相近。
预计的结果应该是空白组很低,不知道这是为什么?
总觉得是这株细胞的问题,似乎长太快了。
不知道有没有人做过相关的实验,或者养过人肺成纤维细胞,麻烦帮我看看这株细胞有没有什么问题呢?
谢谢各位啦~

MTT做不出来,麻烦大家帮我分析一下,先谢过啦~
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MTT做不出来,麻烦大家帮我分析一下,先谢过啦~-1
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MTT做不出来,麻烦大家帮我分析一下,先谢过啦~-2
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zoemeig

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by dengxin6366 at 2015-05-16 11:27:00
空白组可能OD值相对过高,楼主可以尝试适当降低细胞密度,这类细胞生长比较旺盛。

你好~我试了8000个细胞每孔和2000个细胞每孔,结果是空白组OD值都很高
3楼2015-05-16 12:32:09
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dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
辣笔v小新: 金币+1, 鼓励应助交流 2015-05-16 13:38:32
zoemeig: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-05-22 10:11:54
zoemeig: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-22 10:12:40
空白组可能OD值相对过高,楼主可以尝试适当降低细胞密度,这类细胞生长比较旺盛。
2楼2015-05-16 11:27:00
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dengxin6366

至尊木虫 (知名作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zoemeig at 2015-05-16 12:32:09
你好~我试了8000个细胞每孔和2000个细胞每孔,结果是空白组OD值都很高...

你可以试试1000,还有个方法,DMSO加200uL试试
4楼2015-05-16 16:07:17
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zoemeig

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dengxin6366 at 2015-05-16 16:07:17
你可以试试1000,还有个方法,DMSO加200uL试试...

好的,我试试。
请问你有没有养过肺成纤维细胞啊?我这细胞形态正常吗?有人说我的细胞可能分化了,而且我感觉细胞长的越来越大了。
5楼2015-05-16 16:30:57
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