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半半911

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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在线: 116.5小时
虫号: 2478619
注册: 2013-05-23
专业: 植物病理学

[求助] 扩增片段大小约5Kb的cDNA片段已有2人参与

本人最近实验要扩增一段约5Kb的cDNA（其中有1Kb左右GC含量比较高，约70%），试过各种酶都没有效果（La taq， La with GC buffer, primer star， primer star GXL），请问有扩增过这种片段的经验的怎么解决？或者帮忙推荐哪个公司可以提供扩增这种大片段的技术服务。谢谢！！！

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1楼2015-05-02 20:11:14

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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 61 (初中生)
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散金: 1
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专业: 发育生物学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
半半911: 金币+5, ★有帮助 2015-05-03 21:13:33

建议：用NEB公司的phusion酶，用其自带的GC buffer或其他公司的GC buffer均可。扩增时退火温度设定为引物Tm值+2度，其它条件按说明书进行。该酶对扩增长片段很有效，且保真性超高。祝你好运！

3楼2015-05-03 16:56:46

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