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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 前处理 » 硅胶柱层析相关问题
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hqj200808

铜虫 (小有名气)

[求助] 硅胶柱层析相关问题已有4人参与

1，大家做硅胶柱层析纯化时，装好的柱子是重复利用么？还是一次性的。感觉每次能纯化的物质非常的少，要是每次都重新装柱特别麻烦，但是若不重新装，要把所有的东西都洗脱下来 耗费大量洗脱剂，而去一般最后的洗脱剂极性都是非常大的，是否把所有东西都洗脱下来后 还要用初始洗脱剂进行洗脱（这样才不改变柱子最初的极性）。
2，这样的柱子是不是说明拖尾比较严重呀？要怎么办才好呢

硅胶柱层析相关问题
柱色谱20150501.jpg
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1楼2015-05-02 18:06:05
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hydros

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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hqj200808: 金币+3, ★有帮助, 谢谢 2015-05-02 23:34:36
硅胶都是一次性的。没见谁重复利用过。你可以试验后分享一下。你的柱子不是拖尾。红色部分不能说明分离效果，甚至可能没什么东西。一切以TLC的情况判断分离效果

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2楼2015-05-02 22:55:56
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hqj200808

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hydros at 2015-05-02 22:55:56
硅胶都是一次性的。没见谁重复利用过。你可以试验后分享一下。你的柱子不是拖尾。红色部分不能说明分离效果，甚至可能没什么东西。一切以TLC的情况判断分离效果

额，  我确实是重复利用了，只是感觉浪费好多洗脱剂。然后 我分离的是色素， 光谱扫描初步看应该是分开了几种物质，只是感觉分界有点模糊，不晓得大家跑的柱子都是什么样的。没看到别人做过，所以不晓得“对”是个什么样子

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3楼2015-05-02 23:20:35
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要装那么长的柱子。百来毫克级别的长径比不超过15，十几克往上的甚至可以低于3。柱子装紧，敲打结实是关键。多花时间用TLC筛选溶剂。

正相硅胶都是一次性的，反相可以重复使用。

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hqj200808
4楼2015-05-02 23:23:40
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hqj200808

铜虫 (小有名气)
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引用回帖:
4楼: Originally posted by superyeast at 2015-05-02 23:23:40
不要装那么长的柱子。百来毫克级别的长径比不超过15，十几克往上的甚至可以低于3。柱子装紧，敲打结实是关键。多花时间用TLC筛选溶剂。

正相硅胶都是一次性的，反相可以重复使用。
...

恩，我是装了柱子，放了一个晚上，感觉也没怎么下降就用了。上样量与硅胶比 1：10，我想问下是不是好的分离是一截一截的，中间没有什么其他物质，这样收集比较方便点。其实这个分离的和TLC结果差不多，就是时间 太长了。是不是用制备型的TLC还好些

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5楼2015-05-02 23:33:57
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匿名

用户注销 (知名作家)

精修问题可私信
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6楼2015-05-03 08:23:38
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huangdonghai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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hqj200808: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-05-03 12:46:28
首先纠正一个误区，硅胶是可以回收利用的，但实验室没有回收的条件，所以一般直接一次性，然后扔掉。就算回收，绝不是楼主那么回收的，你用大极性溶剂洗脱过后，溶剂就会被吸附到硅胶上面，用小极性的是不能置换大极性的溶剂的，所以你那种回收的方法是绝对不行的，你那种方法就算能用，也不再是吸附色谱了，有可能变成液液分配色谱了。
其次，柱子上面肉眼能见的色带只能作为参考，还是要小体积接收，然后薄层层析确定合并，严格的讲，薄层层析后，在254下面看了还要显色剂显色再看，之后才能合并。
最后，我看到有层主在谈高径比的问题，小柱子可以看看，作为参考，但大柱子就不要管高径比了。我装过直径20㎝、高20㎝的，也装过直径10㎝、高200㎝的，还装过直径5㎝、高30——50㎝的，装柱主要看硅胶的粒度和分离材料的薄层行为。

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7楼2015-05-03 08:54:12
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hqj200808

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huangdonghai at 2015-05-03 08:54:12
首先纠正一个误区，硅胶是可以回收利用的，但实验室没有回收的条件，所以一般直接一次性，然后扔掉。就算回收，绝不是楼主那么回收的，你用大极性溶剂洗脱过后，溶剂就会被吸附到硅胶上面，用小极性的是不能置换大极 ...

恩，谢谢，但是洗脱下来的东西本来就比较稀了，每一管薄层层析的话 到薄层板上也分不出来呀，是不是可以测吸光度，然后每个峰进行收集？有人这么建议。会不会直接用制备型薄层更方便些？

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8楼2015-05-03 12:46:05
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superyeast

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by hqj200808 at 2015-05-02 07:33:57
恩，我是装了柱子，放了一个晚上，感觉也没怎么下降就用了。上样量与硅胶比 1：10，我想问下是不是好的分离是一截一截的，中间没有什么其他物质，这样收集比较方便点。其实这个分离的和TLC结果差不多，就是时间 太 ...

简单地放放是不够的。一定要拿软木块，橡胶塞一类轻轻敲打。而且是敲一会放放液，关上活塞再敲一会。最后敲掉10%的体积是正常的。

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9楼2015-05-03 14:09:12
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w091226

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lich666 at 2015-05-03 08:23:38
做色素用硅胶可能吸附比较大，损失多。粗分完了后头多用用凝胶，效果应该很好。

我做的是乙酸乙酯石油醚体系，每次做完后都用乙酸乙酯冲的柱子。然后就继续做样，重复几次后，样品没有规律了，提前很多出峰。我自己分析了一下，有可能是柱层析硅胶吸附能力减弱导致的。请教大神们帮忙分析一下有没有什么其他的原因
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10楼2016-05-12 16:33:24
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