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chin_jl

铜虫 (小有名气)

[求助] 发酵液石油醚萃取旋蒸后质量都不一样,还有分段萃取的问题。 已有2人参与

小弟我在做微生物发酵液萃取方面的实验,经过萃取条件摸索,发现石油醚萃取效果比较好,能够萃取到发酵液里的抑菌活性物质,所以后面用石油醚进行小批量发酵萃取。
一共做了3次,第一次,2L发酵液,石油醚等体积萃取三次;第二次,发酵液5L,等体积萃取3次;第三次,发酵液2L,等体积萃取3 次。那么问题来了,这三次,石油醚相萃取结束以后,进行旋蒸,结果粗提物的质量并没有和发酵液体积成正比,
第一次得到粗提物1.44g;第二次得到粗提物230mg;第三次粗提物得到27mg,所以我现在很是蛋疼,而且第三次,粗提物石油醚溶解呈现天蓝色,而前面两次没有明显的颜色,而且每次粗体的抑菌活性也不一样,所以我很是蛋疼。
我之前在摸条件的时候,石油醚萃取后的粗提物抑菌活性非常好,所以进行下面的小批量发酵往下面摸条件,但是现在这三次,在萃取这里就没有很好的重现性,所以我现在很是凌乱,不知道该怎么办了。
不知道有没有学长学姐前辈们知道这是为什么,能不能给点指点,帮忙分析以下。
再就是,我要不要继续做分段萃取,我之前是用石油醚,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇摸索的萃取条件,之前是石油醚效果好,现在要不要继续分段萃取呢 ?那样是不是很浪费试剂啊,我意思是就是用这四种试剂对发酵液依次等体积萃取三遍,然后看看每一部分的抑菌活性如何,这么做可行吗?这次做的发酵液还有,就是用石油醚萃取完的发酵液,希望大家能来指点以下。谢谢
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chin_jl: 金币+5 2015-04-22 10:31:04
具体发生什么问题光这么看不知道,除非你操作出现问题,另外还有个问题,你那2L,5L,2L发酵液是依次取的还是分次发酵的,可能重复性本身不好,如果是一罐子里依次取的则也有可能你没混匀就取了
2楼2015-04-22 08:49:17
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chin_jl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by czzlnkar at 2015-04-22 08:49:17
具体发生什么问题光这么看不知道,除非你操作出现问题,另外还有个问题,你那2L,5L,2L发酵液是依次取的还是分次发酵的,可能重复性本身不好,如果是一罐子里依次取的则也有可能你没混匀就取了

具体操作都是一样的,就是发酵完了,我是200ml每次萃取的,操作一直都是一样的,但是每次重现性都不一致。。。所以,我也很郁闷。。不知道为什么
3楼2015-04-22 10:30:57
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chin_jl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by czzlnkar at 2015-04-22 08:49:17
具体发生什么问题光这么看不知道,除非你操作出现问题,另外还有个问题,你那2L,5L,2L发酵液是依次取的还是分次发酵的,可能重复性本身不好,如果是一罐子里依次取的则也有可能你没混匀就取了

之前摸条件是依次萃取的
4楼2015-04-22 10:31:41
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chin_jl at 2015-04-22 10:30:57
具体操作都是一样的,就是发酵完了,我是200ml每次萃取的,操作一直都是一样的,但是每次重现性都不一致。。。所以,我也很郁闷。。不知道为什么...

我估计是你的发酵液不匀吧,本来发酵的菌就是水不能溶的,如果你是一罐子发酵完每次都从这里取发酵液进行提取的话就有可能因为不匀造成的,这种菌类产生的物质既然能溶于石油醚,其水溶性估计不会太高,所以沉降层和上清液层物质含量一致不一致不好说,取样之前搅匀一下
如果你是发酵一次做一次你还是考虑下发酵条件什么的吧(这部分我不懂)
5楼2015-04-22 11:16:24
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chin_jl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by czzlnkar at 2015-04-22 11:16:24
我估计是你的发酵液不匀吧,本来发酵的菌就是水不能溶的,如果你是一罐子发酵完每次都从这里取发酵液进行提取的话就有可能因为不匀造成的,这种菌类产生的物质既然能溶于石油醚,其水溶性估计不会太高,所以沉降层 ...

再就是我想问问,为什么我分段萃取的时候,摸索条件的时候,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇萃取效果那么差呢?并且石油醚才开始做的时候效果也不好,后面把萃取后两相静止时间2h以上以后萃取效果才好点的。。。

再就是我发酵是用的500毫升的三角瓶摇床发酵的。。。还没开始用罐子,这个有影响吗?
6楼2015-04-22 12:44:28
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czzlnkar

新虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by chin_jl at 2015-04-22 12:44:28
再就是我想问问,为什么我分段萃取的时候,摸索条件的时候,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇萃取效果那么差呢?并且石油醚才开始做的时候效果也不好,后面把萃取后两相静止时间2h以上以后萃取效果才好点的。。。

再就是 ...

可能会有乳化,石油醚和水互溶程度极低
我不太懂发酵的问题,不过有影响估计有的,没问题还要中试做什么
7楼2015-04-22 13:18:15
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chin_jl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by czzlnkar at 2015-04-22 13:18:15
可能会有乳化,石油醚和水互溶程度极低
我不太懂发酵的问题,不过有影响估计有的,没问题还要中试做什么...

我现在真的只能认为是季节不一样,微生物次级代谢产物不一样吧。。。。哎。。。感觉回到解放前了,,目测得从头开始了
8楼2015-04-22 21:14:16
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刘烈奥

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by chin_jl at 2015-04-22 12:44:28
再就是我想问问,为什么我分段萃取的时候,摸索条件的时候,氯仿,乙酸乙酯,正丁醇萃取效果那么差呢?并且石油醚才开始做的时候效果也不好,后面把萃取后两相静止时间2h以上以后萃取效果才好点的。。。

再就是 ...

药瓶发酵和发酵罐发酵所得的发酵液的成份肯定会有差别的,最好就是用摇瓶就一啊一致直用摇瓶。还有就是你的保证每次接种的量,菌的活性,培养条件尽量一致。这些因素都有肯能引起菌的代谢同路改变,产的物质不一样。
我的脚步,你住当不了!
9楼2015-10-19 11:25:16
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chin_jl

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 刘烈奥 at 2015-10-19 11:25:16
药瓶发酵和发酵罐发酵所得的发酵液的成份肯定会有差别的,最好就是用摇瓶就一啊一致直用摇瓶。还有就是你的保证每次接种的量,菌的活性,培养条件尽量一致。这些因素都有肯能引起菌的代谢同路改变,产的物质不一样 ...

谢谢,现在已经好很多了,之前的问题解决了

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10楼2015-10-19 11:48:17
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