应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 725  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xinniya

金虫 (小有名气)

[交流] 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？

我用E-Taq酶扩增长为2871bp的片段，引物是特异引物，长度为18bp，Tm值是54。条件是，25微升的体系，酶0.2微升；dNTP2微升，模板和引物均为1微升；94度5min----94度50sec-----54度50sec-------72度1min45sec-----72度10min；温度梯度上下浮动5度。
结果扩出来的带有很多小于2800的杂带，目的带很不清晰。这是怎么回事？是因为引物太短还是延伸的时间不够？还是酶不合适？
多谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-07-01 10:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
那扩增产物再次扩增哦，也许会好
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-07-01 10:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
感觉是不是你的延伸时间有点短？
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-07-01 10:52:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静水深流106

铁虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
可以提高你的退火温度,减少模板浓度,减少循环数看下
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-07-01 11:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
嗯,同意二楼的说法,一般来说最可以保证的是1K/s,所以长度比较大,延伸有些短了
还有就是那么长一般出现错配比较多
你的引物长度也一般,我们至少都要二十一个配对的
还有就是你引物可能有同源性,建议比下序列,换个引物试试
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2008-07-01 11:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinniya

金虫 (小有名气)
我换了个专门扩增长链的试试，你们说可行否？
赞一下 回复此楼
6楼2008-07-24 10:11:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
引用回帖:
Originally posted by xinniya at 2008-7-24 10:11:
我换了个专门扩增长链的试试，你们说可行否？

可以试下！

出现杂带的原因很多：

1、引物特异性不高，产生了非特异性结合;
2、退火温度过低，使引物菲特异性结合；
3、体系污染。

我感觉你可以提高下退火温度，延长延伸时间（1K/S），模板量减少！
赞一下 回复此楼
7楼2008-07-24 16:33:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinniya

金虫 (小有名气)
好的，谢谢
回复此楼
8楼2008-07-29 08:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyan6817

还有个办法，将目的片段回收，做模板进行扩增
赞一下 回复此楼
9楼2008-07-29 09:03:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyzwj1118

木虫 (小有名气)
先说一下扩增的是东西啊，cDNA，还是基因组，具体是做的什么东西，大家才好帮你分析
赞一下 回复此楼
10楼2008-07-29 10:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xinniya 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +3 小张zxy张 2026-03-26 5/250 2026-03-27 18:42 by 小张zxy张
[考研] 291求调剂 +12 hhhhxn.. 2026-03-23 18/900 2026-03-27 17:41 by ditto77778
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +4 Ripcord上岸 2026-03-27 4/200 2026-03-27 17:00 by zhyzzh
[考研] 0703一志愿9，初试成绩：338，四六级已过，有科研经历，求调剂！ +3 Zuhui0306 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:09 by shangxh
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 0703化学求调剂 +3 丹青奶盖 2026-03-26 5/250 2026-03-26 20:11 by macy2011
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 334分 一志愿武理 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-26 4/200 2026-03-26 16:00 by 不吃魚的貓
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 网络空间安全0839招调剂 +4 w320357296 2026-03-25 6/300 2026-03-25 17:59 by 255671
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 一志愿河北工业大学0817化工278分求调剂 +7 jhybd 2026-03-23 12/600 2026-03-24 09:03 by jhybd
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭