应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 719  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xinniya

金虫 (小有名气)

[交流] 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？

我用E-Taq酶扩增长为2871bp的片段，引物是特异引物，长度为18bp，Tm值是54。条件是，25微升的体系，酶0.2微升；dNTP2微升，模板和引物均为1微升；94度5min----94度50sec-----54度50sec-------72度1min45sec-----72度10min；温度梯度上下浮动5度。
结果扩出来的带有很多小于2800的杂带，目的带很不清晰。这是怎么回事？是因为引物太短还是延伸的时间不够？还是酶不合适？
多谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-07-01 10:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
那扩增产物再次扩增哦，也许会好
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-07-01 10:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
感觉是不是你的延伸时间有点短？
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-07-01 10:52:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静水深流106

铁虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
可以提高你的退火温度,减少模板浓度,减少循环数看下
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-07-01 11:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
嗯,同意二楼的说法,一般来说最可以保证的是1K/s,所以长度比较大,延伸有些短了
还有就是那么长一般出现错配比较多
你的引物长度也一般,我们至少都要二十一个配对的
还有就是你引物可能有同源性,建议比下序列,换个引物试试
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2008-07-01 11:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinniya

金虫 (小有名气)
我换了个专门扩增长链的试试，你们说可行否？
赞一下 回复此楼
6楼2008-07-24 10:11:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioartist

木虫 (正式写手)

无菌草莓
引用回帖:
Originally posted by xinniya at 2008-7-24 10:11:
我换了个专门扩增长链的试试，你们说可行否？

可以试下！

出现杂带的原因很多：

1、引物特异性不高，产生了非特异性结合;
2、退火温度过低，使引物菲特异性结合；
3、体系污染。

我感觉你可以提高下退火温度，延长延伸时间（1K/S），模板量减少！
赞一下 回复此楼
7楼2008-07-24 16:33:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xinniya

金虫 (小有名气)
好的，谢谢
回复此楼
8楼2008-07-29 08:17:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyan6817

还有个办法，将目的片段回收，做模板进行扩增
赞一下 回复此楼
9楼2008-07-29 09:03:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyzwj1118

木虫 (小有名气)
先说一下扩增的是东西啊，cDNA，还是基因组，具体是做的什么东西，大家才好帮你分析
赞一下 回复此楼
10楼2008-07-29 10:19:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xinniya 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 7/350 2026-03-28 00:42 by 白QF
[考研] 291求调剂 +6 孅華 2026-03-22 6/300 2026-03-27 19:56 by WYUMater
[考研] 315分求调剂 +6 26考研上岸版26 2026-03-26 6/300 2026-03-27 19:54 by WYUMater
[考研] 化学调剂 +4 爱吃番茄的旭 2026-03-24 5/250 2026-03-27 17:50 by kiokin
[考研] 328求调剂 +6 嗯滴的基本都 2026-03-27 6/300 2026-03-27 16:49 by sanrepian
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 349求调剂 +4 李木子啊哈哈 2026-03-25 4/200 2026-03-26 22:49 by fmesaito
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 340求调剂 +3 Amber00 2026-03-26 3/150 2026-03-26 18:57 by 不吃魚的貓
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 300分，材料，求调剂，英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +10 纸鱼ly 2026-03-21 11/550 2026-03-24 17:22 by qingfeng258
[考研] 300求调剂，材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 341求调剂(一志愿湖南大学070300) +5 番茄头--- 2026-03-22 6/300 2026-03-23 23:45 by Txy@872106
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭