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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
1、延伸时间不够哦，最好按照1kb/min来计算
2、引物真的是特异的？才18nt，其实是很短的。我用25nt的引物扩2xxbp的片段有时候都会出现非特异条带。建议重新设计引物，一般不要低于20bp。虽然长引物容易出现dimer，但是只要dimer的自由能不超过-10kcal/mol就不会太难扩，况且退火温度还那么高呢
3、用降落PCR的方法可以减少非特异条带的数目，你这里的温度梯度还可以再拉大距离。一般我都把温度拉开10℃。
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11楼2008-07-29 15:11:35
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xinniya

金虫 (小有名气)
桃果肉里面的LOX基因，已知全长2871bp，扩的cDNA
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12楼2008-07-30 08:42:36
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