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求助:2871bp的片段扩出来很多杂带,怎么回事?
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我用E-Taq酶扩增长为2871bp的片段,引物是特异引物,长度为18bp,Tm值是54。条件是,25微升的体系,酶0.2微升;dNTP2微升,模板和引物均为1微升;94度5min----94度50sec-----54度50sec-------72度1min45sec-----72度10min;温度梯度上下浮动5度。 结果扩出来的带有很多小于2800的杂带,目的带很不清晰。这是怎么回事?是因为引物太短还是延伸的时间不够?还是酶不合适? 多谢了! |
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