应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 724  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xinniya

金虫 (小有名气)

[交流] 求助：2871bp的片段扩出来很多杂带，怎么回事？

我用E-Taq酶扩增长为2871bp的片段，引物是特异引物，长度为18bp，Tm值是54。条件是，25微升的体系，酶0.2微升；dNTP2微升，模板和引物均为1微升；94度5min----94度50sec-----54度50sec-------72度1min45sec-----72度10min；温度梯度上下浮动5度。
结果扩出来的带有很多小于2800的杂带，目的带很不清晰。这是怎么回事？是因为引物太短还是延伸的时间不够？还是酶不合适？
多谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-07-01 10:29:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyixst

木虫 (正式写手)
reasonspare(金币+0,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
感觉是不是你的延伸时间有点短？
赞一下(10人) 回复此楼
3楼2008-07-01 10:52:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

yuyixst

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
那扩增产物再次扩增哦，也许会好
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2008-07-01 10:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

静水深流106

铁虫 (初入文坛)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
可以提高你的退火温度,减少模板浓度,减少循环数看下
赞一下(10人) 回复此楼
4楼2008-07-01 11:21:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):楼主还有问题，你再看看。
嗯,同意二楼的说法,一般来说最可以保证的是1K/s,所以长度比较大,延伸有些短了
还有就是那么长一般出现错配比较多
你的引物长度也一般,我们至少都要二十一个配对的
还有就是你引物可能有同源性,建议比下序列,换个引物试试
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2008-07-01 11:28:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856，材料与化工321分求调剂 +7 大馋小子 2026-03-27 8/400 2026-03-27 22:31 by 无际的草原
[考研] 070300化学求调剂 +4 起个名咋这么难 2026-03-27 4/200 2026-03-27 21:39 by 83503孙老师
[考研] 一志愿上海理工能源动力（085800）310分求调剂 +3 zhangmingc 2026-03-27 4/200 2026-03-27 19:01 by 给你你注意休息
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 307求调剂 +8 超级伊昂大王 2026-03-24 9/450 2026-03-27 15:34 by 超级伊昂大王
[考研] 308求调剂 +6 墨墨漠 2026-03-27 6/300 2026-03-27 15:20 by caszguilin
[考研] 考研调剂 +10 呼呼？~+123456 2026-03-24 10/500 2026-03-27 11:46 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学一志愿南京师范大学303求调剂 +3 zzffylgg 2026-03-24 3/150 2026-03-27 10:42 by shangxh
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 一志愿郑州大学，080500学硕，总分317分求调剂 +4 举个栗子oi 2026-03-24 5/250 2026-03-26 23:15 by 不吃魚的貓
[考研] 071000生物学求调剂，初试成绩343 +6 小小甜面团 2026-03-25 6/300 2026-03-26 23:01 by 不吃魚的貓
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 293求调剂 +7 加一一九 2026-03-24 7/350 2026-03-25 12:02 by userper
[考研] 305分求调剂（食品工程） +5 Sxy112 2026-03-21 7/350 2026-03-24 12:27 by 544594351
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭