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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 拖带现象
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)

[求助] 拖带现象 已有3人参与

我的目的条带是1kb，运用降落PCR，多次改变了退火温度，反应体系也优化，引物模板也换过，但出现的现象都大同小异，从加样孔就开始拖带，一片白色
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努力成为专业人士
1楼 2015-04-01 16:16:12
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781055707

木虫 (著名写手)
发图来看看
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-04-01 16:59:46
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有没有可能是扩增酶的问题？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-04-01 17:01:01
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、引物设计不好，pcr产物不纯
2、琼脂糖凝胶制的不好（加热融化时不完全，在光下还可以看到小珠子），也会有拖尾现象
楼主应该上个图的
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4楼2015-04-01 21:45:07
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-04-01 21:45:07
1、引物设计不好，pcr产物不纯
2、琼脂糖凝胶制的不好（加热融化时不完全，在光下还可以看到小珠子），也会有拖尾现象
楼主应该上个图的

引物完全配对；marker没有拖带现象，稍等图片上来
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努力成为专业人士
5楼2015-04-02 08:50:34
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-01 17:01:01
有没有可能是扩增酶的问题？

marker的条带没问题，对照品也正常，酶应该没什么问题的
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努力成为专业人士
6楼2015-04-02 09:14:42
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-04-01 21:45:07
1、引物设计不好，pcr产物不纯
2、琼脂糖凝胶制的不好（加热融化时不完全，在光下还可以看到小珠子），也会有拖尾现象
楼主应该上个图的

marker和对照品没有拖带，引物完全配对，就是目的基因的GC含量较高，图片不会上传
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努力成为专业人士
7楼2015-04-02 09:16:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
7楼: Originally posted by yujifeierhwf at 2015-04-02 09:16:58
marker和对照品没有拖带，引物完全配对，就是目的基因的GC含量较高，图片不会上传...

目的基因的GC含量高，才是你扩不出来的原因，你不说谁知道啊，，，，，
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-04-02 10:10:21
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浩远天涯

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yujifeierhwf at 2015-04-02 09:16:58
marker和对照品没有拖带，引物完全配对，就是目的基因的GC含量较高，图片不会上传...

楼主的模板是提的基因组还是直接菌落呀，模板不好也可能有拖带。楼主对照没问题，说明PCR条件及引物都没问题，就是不知对照组条带亮度如何？
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9楼2015-04-02 10:54:21
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chibang1220

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没图不好说，应该是DNA有讲解，或者是引物特异性不好存在非特异扩增，还可能是你胶的浓度太高，试试0.4%浓度胶，希望对你有帮助
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人的差别在于业余时间
10楼2015-04-02 22:59:11
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