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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)

[求助] 拖带现象 已有3人参与

我的目的条带是1kb,运用降落PCR,多次改变了退火温度,反应体系也优化,引物模板也换过,但出现的现象都大同小异,从加样孔就开始拖带,一片白色
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781055707

木虫 (著名写手)

发图来看看
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-04-01 16:59:46
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有没有可能是扩增酶的问题?
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-04-01 17:01:01
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、引物设计不好,pcr产物不纯
2、琼脂糖凝胶制的不好(加热融化时不完全,在光下还可以看到小珠子),也会有拖尾现象
楼主应该上个图的
4楼2015-04-01 21:45:07
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-04-01 21:45:07
1、引物设计不好,pcr产物不纯
2、琼脂糖凝胶制的不好(加热融化时不完全,在光下还可以看到小珠子),也会有拖尾现象
楼主应该上个图的

引物完全配对;marker没有拖带现象,稍等图片上来
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5楼2015-04-02 08:50:34
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-04-01 17:01:01
有没有可能是扩增酶的问题?

marker的条带没问题,对照品也正常,酶应该没什么问题的
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6楼2015-04-02 09:14:42
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yujifeierhwf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 浩远天涯 at 2015-04-01 21:45:07
1、引物设计不好,pcr产物不纯
2、琼脂糖凝胶制的不好(加热融化时不完全,在光下还可以看到小珠子),也会有拖尾现象
楼主应该上个图的

marker和对照品没有拖带,引物完全配对,就是目的基因的GC含量较高,图片不会上传
努力成为专业人士
7楼2015-04-02 09:16:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
7楼: Originally posted by yujifeierhwf at 2015-04-02 09:16:58
marker和对照品没有拖带,引物完全配对,就是目的基因的GC含量较高,图片不会上传...

目的基因的GC含量高,才是你扩不出来的原因,你不说谁知道啊,,,,,
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-04-02 10:10:21
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浩远天涯

金虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yujifeierhwf at 2015-04-02 09:16:58
marker和对照品没有拖带,引物完全配对,就是目的基因的GC含量较高,图片不会上传...

楼主的模板是提的基因组还是直接菌落呀,模板不好也可能有拖带。楼主对照没问题,说明PCR条件及引物都没问题,就是不知对照组条带亮度如何?
9楼2015-04-02 10:54:21
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chibang1220

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没图不好说,应该是DNA有讲解,或者是引物特异性不好存在非特异扩增,还可能是你胶的浓度太高,试试0.4%浓度胶,希望对你有帮助
人的差别在于业余时间
10楼2015-04-02 22:59:11
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