10楼: Originally posted by SAM001 at 2015-03-30 10:57:46
你用的是什么公司的酶，不同酶的组合用的buffer可能不一样。单条带可能一个是没切开的超螺旋，一个是切开一半的质粒...

10楼: Originally posted by SAM001 at 2015-03-30 10:57:46
你用的是什么公司的酶，不同酶的组合用的buffer可能不一样。单条带可能一个是没切开的超螺旋，一个是切开一半的质粒...

9楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-30 10:28:05
楼主载体切不开呀，那你可以换载体试试。

13楼: Originally posted by 明太鱼 at 2015-03-30 11:03:34
换载体的话没有合适的酶切位点，得重新设计引物，又得平滑什么的...

14楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-30 11:22:24
先在要连得载体上看看目的片段SpeI后面的酶切片段，再在t载体上查查有无这个酶切位点，在T载体上这个酶切位点可以是两个或以上。...

15楼: Originally posted by 明太鱼 at 2015-03-30 12:23:22
表达载体上SpeI后还有SacI,和EcoRI是但酶切位点，也就是可以选SpeISacI或SpeIEcoRI、但是在连接好基因的T载体上，这两种组合切下的片段都是相反的，即在T上SacIEcoRI都在SpeI前面，...

16楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-30 12:45:15
在合成一对加酶切位点，保护碱基的引物吧，在扩出来连过，引物反正一二百就行了。...

17楼: Originally posted by 明太鱼 at 2015-03-30 15:58:24
这个想过了，表达载体上其他可用的酶切位点不是反向的就是基因内部有，很纠结的一个基因，还可以用XbaI和SpeI做 双酶切，他们两个是表达载体上相邻的酶切位点，好像是同尾酶，不知道可不可以这么做请指教（表达载体 ...

18楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-30 16:40:09
什么载体？...