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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 求助关于药物代谢中生物样品预处理方法以及HPLC的选择
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赵EVAN

新虫 (小有名气)

[求助] 求助关于药物代谢中生物样品预处理方法以及HPLC的选择 已有3人参与

一年级小研究生做药物代谢试验， 药物极性较大，人体蛋白结合率大概50，参考文献提示该药物大鼠体内20分钟达峰，峰浓度800ng/ml，50分钟基本消除完，提取方法的都是固相萃取或固相与沉淀蛋白结合，用的检测大多为LCMs。。在实验室也没人指导，刚来一年纪上完课，老板就让我自己做，伤心啊~~~
算了不提了 还是说实验吧
我用HPLC测试原料药10ug/ml在甲醇：水=85:15能够出峰，并且与内标分开，但是用了各种预处理方法，甲醇乙青沉淀蛋白都不行，乙酸乙酯也不行，老板说不让用固相，说要优化提取条件，我实在不知道咋办了？？？？求各位师兄师姐帮下啊。。。。。
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1楼 2015-03-16 22:29:54
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
http://pan.baidu.com/s/1pJG8vIb
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坚持
2楼2015-03-19 20:07:29
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renzhichu525

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用三氯乙酸做沉淀剂试试，但流动相也得用酸性。
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3楼2015-03-23 16:20:38
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zhangxuan200

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

原料药10ug/ml在甲醇：水=85:15能够出峰         
药物极性较大，人体蛋白结合率大概50

这里的液相条件应该优化一下啊，药物极性大，应该用水相比例大的比例，否则，沉淀的杂质峰很容易干扰药物峰。另外，建议用缓冲液，如用乙腈-磷酸氢二钠，pH也可以考察，看对药物和干扰杂质的分离度情况。总之，液相可以优化的地方很多，如有机相比例，缓冲液pH，不同填料类型色谱柱（及不同长度），不同波长，梯度洗脱方式等的。也可考虑加离子对试剂（因为你的药物极性大）
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4楼2015-03-23 16:37:45
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赵EVAN

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by renzhichu525 at 2015-03-23 16:20:38
用三氯乙酸做沉淀剂试试，但流动相也得用酸性。

实验室没有三氯乙酸，我想问下这些沉淀蛋白都是怎选择 ，为啥要选择这种，加酸的目的是什么
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5楼2015-03-23 22:50:31
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赵EVAN

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2015-03-23 16:37:45
原料药10ug/ml在甲醇：水=85:15能够出峰         
药物极性较大，人体蛋白结合率大概50

这里的液相条件应该优化一下啊，药物极性大，应该用水相比例大的比例，否则，沉淀的杂质峰很容易干扰药物峰。另外，建议用 ...

你说的那些条件是应该优化，但我不知道怎么优化，你的药物极性大，加离子对试剂，缓冲液，加这些都是为了什么 ，什么情况下要加啊
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6楼2015-03-23 22:52:33
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赵EVAN

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2015-03-19 20:07:29
http://pan.baidu.com/s/1pJG8vIb

这不是我要的吧？
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7楼2015-03-23 22:53:21
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赵EVAN

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2015-03-23 16:37:45
原料药10ug/ml在甲醇：水=85:15能够出峰         
药物极性较大，人体蛋白结合率大概50

这里的液相条件应该优化一下啊，药物极性大，应该用水相比例大的比例，否则，沉淀的杂质峰很容易干扰药物峰。另外，建议用 ...

还有提取方法 用什么  文献都是固相    我们这种药理实验室都没人这么做过
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8楼2015-03-23 22:54:17
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