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赵EVAN

新虫 (小有名气)

[求助] 求助关于药物代谢中生物样品预处理方法以及HPLC的选择 已有3人参与

一年级小研究生做药物代谢试验, 药物极性较大,人体蛋白结合率大概50,参考文献提示该药物大鼠体内20分钟达峰,峰浓度800ng/ml,50分钟基本消除完,提取方法的都是固相萃取或固相与沉淀蛋白结合,用的检测大多为LCMs。。在实验室也没人指导,刚来一年纪上完课,老板就让我自己做,伤心啊~~~
算了不提了 还是说实验吧
我用HPLC测试原料药10ug/ml在甲醇:水=85:15能够出峰,并且与内标分开,但是用了各种预处理方法,甲醇乙青沉淀蛋白都不行,乙酸乙酯也不行,老板说不让用固相,说要优化提取条件,我实在不知道咋办了????求各位师兄师姐帮下啊。。。。。
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
坚持
2楼2015-03-19 20:07:29
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renzhichu525

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

用三氯乙酸做沉淀剂试试,但流动相也得用酸性。
3楼2015-03-23 16:20:38
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zhangxuan200

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

原料药10ug/ml在甲醇:水=85:15能够出峰         
药物极性较大,人体蛋白结合率大概50

这里的液相条件应该优化一下啊,药物极性大,应该用水相比例大的比例,否则,沉淀的杂质峰很容易干扰药物峰。另外,建议用缓冲液,如用乙腈-磷酸氢二钠,pH也可以考察,看对药物和干扰杂质的分离度情况。总之,液相可以优化的地方很多,如有机相比例,缓冲液pH,不同填料类型色谱柱(及不同长度),不同波长,梯度洗脱方式等的。也可考虑加离子对试剂(因为你的药物极性大)
4楼2015-03-23 16:37:45
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赵EVAN

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by renzhichu525 at 2015-03-23 16:20:38
用三氯乙酸做沉淀剂试试,但流动相也得用酸性。

实验室没有三氯乙酸,我想问下这些沉淀蛋白都是怎选择 ,为啥要选择这种,加酸的目的是什么
5楼2015-03-23 22:50:31
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赵EVAN

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2015-03-23 16:37:45
原料药10ug/ml在甲醇:水=85:15能够出峰         
药物极性较大,人体蛋白结合率大概50

这里的液相条件应该优化一下啊,药物极性大,应该用水相比例大的比例,否则,沉淀的杂质峰很容易干扰药物峰。另外,建议用 ...

你说的那些条件是应该优化,但我不知道怎么优化,你的药物极性大,加离子对试剂,缓冲液,加这些都是为了什么 ,什么情况下要加啊
6楼2015-03-23 22:52:33
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赵EVAN

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2015-03-19 20:07:29
http://pan.baidu.com/s/1pJG8vIb

这不是我要的吧?
7楼2015-03-23 22:53:21
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赵EVAN

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhangxuan200 at 2015-03-23 16:37:45
原料药10ug/ml在甲醇:水=85:15能够出峰         
药物极性较大,人体蛋白结合率大概50

这里的液相条件应该优化一下啊,药物极性大,应该用水相比例大的比例,否则,沉淀的杂质峰很容易干扰药物峰。另外,建议用 ...

还有提取方法 用什么  文献都是固相    我们这种药理实验室都没人这么做过
8楼2015-03-23 22:54:17
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