| 查看: 4275 | 回复: 2 | ||
yangbin1金虫 (正式写手)
|
[求助]
crispr/cas9 敲除细菌基因的实验步骤 已有1人参与
|
|
我想用crispr/cas9系统 敲除或失活大肠杆菌中的一些基因。我现在又pCRISPR和pCAS9两个质粒。 但是我不知道具体的试验方法。或者大体的步骤也行。 请各位不吝赐教。 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有72人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于crispr/cas9敲除试剂盒 知道的请进洒
已经有8人回复
- 基因敲除、互补、功能研究等实验怎么做？
已经有57人回复
- Crispr/Cas9 基因敲除：有限稀释法（单克隆挑选）
已经有70人回复
- Crispr/Cas9 在植物系统中的应用（基因敲除或者定点整合）
已经有23人回复
- CRISPR/Cas9 开启基因定点修饰的新篇章!
已经有9人回复
- 想要证明一个启动子是受到氧气调控，怎么设计基因敲除？
已经有7人回复
- Crispr/Cas9进行突变修复
已经有6人回复
- 求助Cas9体系用的质粒px330
已经有14人回复
- 能不能利用细菌CRISPR/cas9系统敲除自身的基因？
已经有11人回复
- 条件性基因敲除动物 基因打靶的相关系统 间的关系
已经有4人回复
- Genome Engineering using CRISPR Cas Systems 文献下载
已经有40人回复
- 中科院李劲松实验室在Cell Stem Cell发文章揭示CRISPR/Cas9存在脱靶效应
已经有19人回复
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2015-03-24 10:30:38
yili_90
金虫 (正式写手)
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 0.013
- 金币: 3136.5
- 散金: 400
- 红花: 11
- 帖子: 464
- 在线: 117.7小时
- 虫号: 2157293
- 注册: 2012-11-30
- 性别: MM
- 专业: 动物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yangbin1: 金币+5, ★有帮助 2015-03-28 09:34:28
yangbin1: 金币+5 2015-06-05 16:59:30
yangbin1: 金币+5, ★有帮助 2015-03-28 09:34:28
yangbin1: 金币+5 2015-06-05 16:59:30
|
1.设计基因切除位点（就是设计sgRNA)。可以利用Crispr.mit在线设计，也可以手动设计后在NCBI进行blast。 2.将设计好的”sgRNA+限制性酶切位点“送到测序公司进行合成 3.用限制性内切酶切割载体 4.连接，转化，鉴定，测序 5.将对的扩增后进行体外转录 *如果是动物，则进行胚胎注射。如果是细胞，可以进行电转。如果是细菌，我估计是转化 6.细胞和细菌会要求载体上有筛选标记，如puro。动物不要求。 哎，其实我也不太清楚。不过前期大致应该就是这样。因为最近我在动物身上做crispr/cas9 |
3楼2015-03-24 13:04:10
