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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » β-内酰胺类抗生素聚合物检测波长选择
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purelove2003

铁虫 (初入文坛)

[求助] β-内酰胺类抗生素聚合物检测波长选择 已有3人参与

想请教一下各位老师，β-内酰胺类抗生素聚合物检测时该如何选择检测波长？目前遇到一个品种，在测定聚合物时（采用TSK G2000 Swxl，pH7.0磷酸盐体系），各检测波长下聚合物的大小差异较大，查询了一些文献，包括药典上的抗生素品种，一般选择254nm波长，也有选择最大吸收波长的，例如231nm、267nm，但该品种在最大吸收波长下的测定结果较小，比其他波长下小了0.8%左右，这种情况下该如何选择检测波长呢？希望各位老师能给点建议，谢谢！
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1楼 2015-02-26 08:52:43
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deayuka

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
检测器的波长应该不会影响柱子本身的分离啊。
比较怀疑是待测物不纯引起的问题，波长变化造成物质响应值的变化导致看起来像是出峰位置变了。
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2楼2015-02-26 13:06:51
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
purelove2003: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！ 2015-02-26 17:32:27
如果凝胶色谱分离出来的是聚合物，他与主成分的吸收应该相似，哪个波长结果都应该差不多。实际上N个β-内酰胺类抗生素聚合物检测中分离出来的不全是聚合物（我把好几个品种分离出来的组分上了LC-MASS），更多是开环物或其他降解杂质，β-内酰胺类抗生素开环后紫外吸收降低，低波长检测应该会大很多。凝胶色谱质控聚合物，真心不靠谱，你看EP、USP收载那么多β-内酰胺类抗生素，有没有用凝胶色谱来控制聚合物的？
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3楼2015-02-26 16:55:27
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456895

禁虫 (正式写手)
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
purelove2003: 金币+2, ★有帮助, 谢谢！ 2015-02-26 17:33:07
本帖内容被屏蔽
4楼2015-02-26 17:21:16
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purelove2003

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by kf1009 at 2015-02-26 16:55:27
如果凝胶色谱分离出来的是聚合物，他与主成分的吸收应该相似，哪个波长结果都应该差不多。实际上N个β-内酰胺类抗生素聚合物检测中分离出来的不全是聚合物（我把好几个品种分离出来的组分上了LC-MASS），更多是开环 ...

EP和USP收载的β-内酰胺类抗生素好像都没有控制聚合物，中国药典收载的基本上都是G10凝胶柱控制，从聚合物的产生机理来看，大部分都是开环以后再聚合的，吸收的确可能会有区别。但是β-内酰胺类抗生素，尤其是注射用的都需要控制聚合物，不知道老师有没有更好的方法来控制？
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5楼2015-02-26 17:37:34
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purelove2003

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 456895 at 2015-02-26 17:21:16
有两个问题：
1）你所说的不同波长下测定是用外标法吗，如果是面积归一化不同的波长相差大属于正常情况。
2）不同的物质的最大吸收应该是不同的，根据我个人理解，你应该是想检测主成分的聚合物。在这种情况下你应 ...

谢谢老师，因为目前用的检测方法检出来的聚合物可能是二聚体、三聚体甚至四聚体，比主峰洗脱早的峰都算作是聚合物，可能会有好几个色谱峰。而且如果用面积归一化不同波长检测结果差异大的话，用外标法来计算，结果同样会差异较大。
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6楼2015-02-26 17:41:33
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by purelove2003 at 2015-02-26 17:37:34
EP和USP收载的β-内酰胺类抗生素好像都没有控制聚合物，中国药典收载的基本上都是G10凝胶柱控制，从聚合物的产生机理来看，大部分都是开环以后再聚合的，吸收的确可能会有区别。但是β-内酰胺类抗生素，尤其是注射 ...

二聚物最为常见，三聚物、四聚物哪有那么容易，理论上虽然有可能，我个人建议参考阿莫西林、美罗培南、头孢曲松等品种，用常规HPLC检测，其专属性更靠谱。我通过LC-MASS确证过数个品种的凝胶色谱法分离出来的高分子组分根本不全是聚合物，更多是开换物等，开环后分子空间位阻变大，出峰也比主成分快。有时候分子量比主成分小的也出在前面。凝胶色谱法测高聚物定性定量皆有问题，不知道CDE为何钟情于此。
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7楼2015-02-26 21:51:52
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by purelove2003 at 2015-02-26 17:41:33
谢谢老师，因为目前用的检测方法检出来的聚合物可能是二聚体、三聚体甚至四聚体，比主峰洗脱早的峰都算作是聚合物，可能会有好几个色谱峰。而且如果用面积归一化不同波长检测结果差异大的话，用外标法来计算，结果 ...

想用外标法，你去试试制备对照品并标定。
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8楼2015-02-26 21:53:46
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purelove2003

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by kf1009 at 2015-02-26 21:51:52
二聚物最为常见，三聚物、四聚物哪有那么容易，理论上虽然有可能，我个人建议参考阿莫西林、美罗培南、头孢曲松等品种，用常规HPLC检测，其专属性更靠谱。我通过LC-MASS确证过数个品种的凝胶色谱法分离出来的高分子 ...

谢谢老师指导！
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9楼2015-02-27 08:00:56
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