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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pfu酶使用
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shengchen

铜虫 (初入文坛)

[求助] pfu酶使用 已有4人参与

请教各位一个问题，本人用一对引物从基因组上扩增片断，同等条件下用taq能扩出，pfu怎么也扩不出；当我用另一对引物从质粒上扩增时，同样的情况也出现了。。。并且经过测序，发现用taq扩出的目的片段都是对的，为什么pfu酶怎么也扩不出来，求教各位高手，谢谢！
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凡人皆有一死，凡人必须侍奉
1楼 2015-02-12 23:10:19
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shengchen

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-02-13 02:25:13
pfu活性不如taq,试下提高模板浓度

我得模板浓度是100ng/微升，应该不是模板浓度问题
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凡人皆有一死，凡人必须侍奉
8楼2015-02-13 20:54:41
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still2008

至尊木虫 (著名写手)

破碎世界的守护者

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
shengchen: 金币+1 2015-02-13 21:44:09
体系不对，buffer不对？酶失活？排除过了吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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有时一本正经，有时胡言乱语。
2楼2015-02-12 23:47:55
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
shengchen: 金币+1 2015-02-13 21:44:20
pfu活性不如taq,试下提高模板浓度
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2015-02-13 02:25:13
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
shengchen(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:56:01
这是经常的事，同样的引物用不同的酶来扩增，有的可以扩出来，有的扩不出来。在用酶试的时候最好按照说明书上的比例来试。我经常遇到这种问题用一种酶怎么也扩不出来，换一种酶就OK了。试着换一下退火温度，变性时间等。
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4楼2015-02-13 12:32:06
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