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shengchen铜虫 (初入文坛)
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pfu酶使用 已有4人参与
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| 请教各位一个问题，本人用一对引物从基因组上扩增片断，同等条件下用taq能扩出，pfu怎么也扩不出；当我用另一对引物从质粒上扩增时，同样的情况也出现了。。。并且经过测序，发现用taq扩出的目的片段都是对的，为什么pfu酶怎么也扩不出来，求教各位高手，谢谢！ |
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4楼2015-02-13 12:32:06
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
shengchen(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:56:12
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shengchen(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-02-13 20:56:12
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呵呵，pfu的概念是高保真酶，那它为什么会有保真性呢，因为它能将错配的碱基切除，从而保真扩增中片段的正确性，所以它能切掉错误的碱基，所以它也可能将模板降解，导致扩增失败。所以，如果你的实验下游不需要进行精密实验的话，不建议使用保真酶。如果你担心普通的Taq酶扩增特异性差杂带较多的话，热启动Taq酶不是很好的选择吗，不会降解模板同时又能绝对的避免非特异性产物生成。 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html |
5楼2015-02-13 17:06:32
