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playboy723金虫 (正式写手)
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[交流]
请教：载体怎样连接？
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| 各位高手：请教一个问题，我这几天正在连接一个载体 片段有1500bp 双酶切 两端的酶切位点分别是BamH1和Xho1 我将片段和载体分别酶切、回收后进行连接 （应该切开了 因为同时做的另一个基因连上了） 连接的条件为：片段与载体比例为10：1 根据摩尔浓度算的 然后16度3小时以上 之后转化 结果没有插进去（虽然有阳性克隆 但挑了40多个克隆 都是假阳性和自连） 但同时做的另一个基因700多bp却挑出很多阳性克隆来 所以我想请教一下 ：是否插入的片段越大连接越困难？ >1500bp的片段连接条件是怎样的？ 或者还有其他的要求和问题我没有注意到 请各位高手不吝赐教 我都快烦死了 谢谢了 |
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