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cily1986

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】蛋白含量测定

请问:
    用考马斯亮蓝法测商品酶的蛋白含量,结果不显色,吸光度为0,有谁知道请指教,谢谢。

[ Last edited by yusen_1982 on 2009-3-24 at 22:01 ]
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无知3096

木虫 (小有名气)


wgcui(金币+1,VIP+0):欢迎讨论!! 4-22 08:26
引用回帖:
Originally posted by winter_gates at 2009-4-2 16:33:
楼上!我太无语了,你太牛了!我还是头一次听说有商品化的非蛋白-酶制剂(如果硬说某些核酸是酶的话,我也噎着吧)。老大,酶就是蛋白,蛋白质的一种罢了。严格来说,根本不存在非蛋白质的enzyme(ribozyme除外了 ...

6楼的同志不要愤世嫉俗啊,说别人的时候先看清楚啊,这种心态不利于科研。酶当然算是蛋白,但商品酶特别是sigma的酶是高纯的,杂质少(杂质极有可能也是蛋白质)。举个例子吧,商品酶10unit/mgProtein, 自己提取或者纯度不高的商品酶可能只有1unit/mgProtein. 由于商品酶活性高但蛋白质含量极低,测蛋白质的方法可能就测不出来了。
一起前进吧!
12楼2009-04-21 17:23:52
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查看全部 18 个回答

fenglianxiang

木虫 (著名写手)

WWE王中王HHH

详细看看是不是哪个条件或者步骤有误。要不就是你这个酶有问题了
http://shop33848714.taobao.com/ 鞣剂加脂水场除醛抗氧消铬;造纸纺织皮革助剂生产工艺技术15066514528
2楼2008-06-11 09:06:56
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l379989165

金虫 (正式写手)

水晶

★ ★
heavence007(金币+1,VIP+0):谢谢分享答案
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):回答很精彩,再奖,生物材料版期待您更多的参与! 5-25 14:53
可以先检查一下试剂或仪器有没有问题了。操作如果也没失误的话应该不会有什么问题的。考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
来是偶然,去是必然,尽其当然,顺其自然。得之淡然,失之泰然,争其必然,自然而然。
3楼2008-06-11 13:49:12
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cily1986

金虫 (小有名气)


heavence007(金币+1,VIP+0):谢谢分享答案
用所配的考马斯亮蓝以牛血清蛋白为标准品能作出标准曲线,而且所买的商品酶经测定是有酶活的。我觉得是不是pH值的影响,可能该蛋白质的等电点在酸性范围内,有可能该蛋白质恰好不带电荷。
4楼2008-06-11 19:41:00
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