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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请问western blot跑出的蛋白分子量跟说明书的差10kd以上怎么回事？
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kassymi

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问western blot跑出的蛋白分子量跟说明书的差10kd以上怎么回事？ 已有2人参与

我的蛋白非成熟的和完全成熟的应该是165kd和175kd，但是我跑出来在190kd和130kd，而且基本没有杂带，主带又很清晰，这是为什么啊？？白高兴了我还以为我终于跑出来了。师姐说这种不是我的目的蛋白。
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1楼 2015-02-04 15:39:12
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
western blot？不是你的目的蛋白一抗怎么抗上的？
算上tag的大小了吗？或者是降解了？或者是不同isoform？
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2楼2015-02-06 11:06:42
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
190kDa和175kDa差别不是很大，高分子量的marker普遍不太准的
130kDa确实差得有些多，有时候蛋白含酸性氨基酸比较多，或者post translational modification会和正常的条带位置不一样
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2015-02-06 12:41:41
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kassymi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-02-06 12:41:41
190kDa和175kDa差别不是很大，高分子量的marker普遍不太准的
130kDa确实差得有些多，有时候蛋白含酸性氨基酸比较多，或者post translational modification会和正常的条带位置不一样

谢谢谢谢！我就当190kd的那个条带是了，130kd那个先不管？您觉得我有必要换个别的牌子的marker吗？我现在用的fermantas那个大家最常用的。170kd以上就没marker了。
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4楼2015-02-07 08:59:20
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kassymi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2015-02-06 11:06:42
western blot？不是你的目的蛋白一抗怎么抗上的？
算上tag的大小了吗？或者是降解了？或者是不同isoform？

因为实验室的博士师姐说有时候杂带就是比目的条带还亮，我也觉得奇怪，就是用的目的蛋白的一抗，不可能是别的蛋白出来，只能说是它的其他修饰形式？
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5楼2015-02-07 09:01:57
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王可轩

新虫 (初入文坛)
楼主，请教下wb湿转时间啊

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6楼2018-11-13 22:49:19
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