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kassymi

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问western blot跑出的蛋白分子量跟说明书的差10kd以上怎么回事?已有2人参与

我的蛋白非成熟的和完全成熟的应该是165kd和175kd,但是我跑出来在190kd和130kd,而且基本没有杂带,主带又很清晰,这是为什么啊??白高兴了我还以为我终于跑出来了。师姐说这种不是我的目的蛋白。
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lihe131

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
western blot?不是你的目的蛋白一抗怎么抗上的?
算上tag的大小了吗?或者是降解了?或者是不同isoform?
2楼2015-02-06 11:06:42
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
190kDa和175kDa差别不是很大,高分子量的marker普遍不太准的
130kDa确实差得有些多,有时候蛋白含酸性氨基酸比较多,或者post translational modification会和正常的条带位置不一样
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2015-02-06 12:41:41
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kassymi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-02-06 12:41:41
190kDa和175kDa差别不是很大,高分子量的marker普遍不太准的
130kDa确实差得有些多,有时候蛋白含酸性氨基酸比较多,或者post translational modification会和正常的条带位置不一样

谢谢谢谢!我就当190kd的那个条带是了,130kd那个先不管?您觉得我有必要换个别的牌子的marker吗?我现在用的fermantas那个大家最常用的。170kd以上就没marker了。
4楼2015-02-07 08:59:20
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kassymi

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lihe131 at 2015-02-06 11:06:42
western blot?不是你的目的蛋白一抗怎么抗上的?
算上tag的大小了吗?或者是降解了?或者是不同isoform?

因为实验室的博士师姐说有时候杂带就是比目的条带还亮,我也觉得奇怪,就是用的目的蛋白的一抗,不可能是别的蛋白出来,只能说是它的其他修饰形式?
5楼2015-02-07 09:01:57
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王可轩

新虫 (初入文坛)

楼主,请教下wb湿转时间啊

发自小木虫Android客户端
6楼2018-11-13 22:49:19
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