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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western bloting SDS-PAGE 考马斯亮蓝 染胶 求助！
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dfgu

新虫 (初入文坛)

[求助] western bloting SDS-PAGE 考马斯亮蓝 染胶 求助！ 已有2人参与

第一次在小木虫上发帖，金币不多，请大家帮帮忙。
现在在做western bloting ，跑完胶后用考马斯亮蓝染胶，照片如下
不知道是什么原因，最接近浓缩胶的地方的条带会出现颜色深浅不一的情况，
想请教请教大家。

western bloting SDS-PAGE 考马斯亮蓝 染胶 求助！
FullSizeRender.jpg


western bloting SDS-PAGE 考马斯亮蓝 染胶 求助！-1
IMG_5330.JPG
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1楼 2015-01-30 19:34:23
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dfgu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by @木笔@ at 2015-01-30 19:41:41
可能有以下几个问题，楼主可以考虑下。第一：胶是否完全凝固好；第二：上样的浓度是否合适，似乎有的太大了；第三，染色液和脱色液是否是新配的，建议楼主新配试试吧。

感谢回复。
您说的胶的问题，后来我自己也想了想，之前配胶的时候分离胶不是特别的水平，很有可能是没有完全凝固好。
上样的浓度也有可能有些大，15well的胶，我上了20ul ，1.8ug/ul的量。
染色液应该没有问题，是新开封的CBB。
对了，我之前有看到一个western bloting 失败的帖子，不知道会不会和这个相关，想让您看一看。
我之前跑胶用的run buffer也是装在塑料瓶里放在冰箱中。
western bloting SDS-PAGE 考马斯亮蓝 染胶 求助！-2
キャプチャ.PNG
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5楼2015-01-31 12:57:12
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@木笔@

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dfgu(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-30 22:35:10
可能有以下几个问题，楼主可以考虑下。第一：胶是否完全凝固好；第二：上样的浓度是否合适，似乎有的太大了；第三，染色液和脱色液是否是新配的，建议楼主新配试试吧。
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做最好的自己！
2楼2015-01-30 19:41:41
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dfgu(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-30 22:35:17
dfgu: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-01-31 12:47:00
你染色的时候是不是一直放那放着了啊，要用小摇床低速摇
胶可能有的地方先凝固了，结块了都
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-30 20:23:59
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dfgu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-30 20:23:59
你染色的时候是不是一直放那放着了啊，要用小摇床低速摇
胶可能有的地方先凝固了，结块了都

感谢回复。
您说的是第三张照片吗？那个是胶本身的问题，跑胶的时候蛋白就停在那里下不去。染色的时候也是用摇床慢慢摇着的。谢谢回复。
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4楼2015-01-31 12:49:41
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