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细菌做敲除时电转化的问题
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liuwukang
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细菌做敲除时电转化的问题
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电转化后加入培养基,摇床培养1小时涂平板,但是摇了之后发现有很多粘稠的东西,是被电死的细菌吗?大家做的时候有这种情况吗
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1楼
2015-01-29 12:52:25
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liuwukang
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2楼
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Originally posted by
logowang
at 2015-01-29 17:55:52
从未出现过类似情况,请检查你使用的培养基,电转用的小杯子(中文我不清楚叫什么) 是否清洁干净,每次电转不要使用过多的细胞,一般保持在30-60ul 的细胞就可以, 不清楚你是否使用过多的细胞而造成浑浊的情况。 ...
可能是细胞有些多,电压是根据类似的文献设置的,培养基和电转杯不会有问题,之前电转化是有成功的,只是一直会有这种比较粘的东西,请问你是做的哪种菌?
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2015-01-29 19:32:01
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从未出现过类似情况,请检查你使用的培养基,电转用的小杯子(中文我不清楚叫什么) 是否清洁干净,每次电转不要使用过多的细胞,一般保持在30-60ul 的细胞就可以, 不清楚你是否使用过多的细胞而造成浑浊的情况。 电转一般会选择1800v 细胞不会死亡太多。
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2015-01-29 17:55:52
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3楼
:
Originally posted by
liuwukang
at 2015-01-29 19:32:01
可能是细胞有些多,电压是根据类似的文献设置的,培养基和电转杯不会有问题,之前电转化是有成功的,只是一直会有这种比较粘的东西,请问你是做的哪种菌?
...
用的菌的种类比较多,但都没出现过这种情况,可能是我们实验室已经有成型的体系,所以我们没有去摸索过条件,直接按照自己的protocol在做。
祝你成功
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4楼
2015-01-29 19:43:32
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一直在做点电转,但没遇到过这种情况,感觉挺奇怪的,不过只要能长,应该没什么问题吧
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6楼
2015-01-30 11:10:44
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