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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 细菌做敲除时电转化的问题
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[求助] 细菌做敲除时电转化的问题 已有2人参与

电转化后加入培养基，摇床培养1小时涂平板，但是摇了之后发现有很多粘稠的东西，是被电死的细菌吗？大家做的时候有这种情况吗
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1楼 2015-01-29 12:52:25
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从未出现过类似情况，请检查你使用的培养基，电转用的小杯子（中文我不清楚叫什么） 是否清洁干净，每次电转不要使用过多的细胞，一般保持在30-60ul 的细胞就可以， 不清楚你是否使用过多的细胞而造成浑浊的情况。 电转一般会选择1800v 细胞不会死亡太多。
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2楼2015-01-29 17:55:52
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by logowang at 2015-01-29 17:55:52
从未出现过类似情况，请检查你使用的培养基，电转用的小杯子（中文我不清楚叫什么） 是否清洁干净，每次电转不要使用过多的细胞，一般保持在30-60ul 的细胞就可以， 不清楚你是否使用过多的细胞而造成浑浊的情况。  ...

可能是细胞有些多，电压是根据类似的文献设置的，培养基和电转杯不会有问题，之前电转化是有成功的，只是一直会有这种比较粘的东西，请问你是做的哪种菌？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-01-29 19:32:01
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logowang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuwukang at 2015-01-29 19:32:01
可能是细胞有些多，电压是根据类似的文献设置的，培养基和电转杯不会有问题，之前电转化是有成功的，只是一直会有这种比较粘的东西，请问你是做的哪种菌？
...

用的菌的种类比较多，但都没出现过这种情况，可能是我们实验室已经有成型的体系，所以我们没有去摸索过条件，直接按照自己的protocol在做。

祝你成功
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4楼2015-01-29 19:43:32
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maila
5楼2015-01-30 08:28:27
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浅语8905

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一直在做点电转，但没遇到过这种情况，感觉挺奇怪的，不过只要能长，应该没什么问题吧
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6楼2015-01-30 11:10:44
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