应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：扩线粒体基因组全序，中间有一段怎么都扩不出来，不知道还能采取什么方法？
51/1返回列表
查看: 2530  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lxx707

金虫 (小有名气)

[求助] 求助：扩线粒体基因组全序，中间有一段怎么都扩不出来，不知道还能采取什么方法？ 已有5人参与

设计了不下20对引物了，有5对能扩出2000左右的片段，但一般测序不出来。拿去克隆，再测序。再不同公司做了比较，有一段2000bp两个公司做得一样，但是NCBI BLAST无结果。其他三段比对不想似，NCBI上也比不出任何东西。万能的亲们，请多多指教，多给注意，实在是太感谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-28 16:12:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

徐官冲123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也出现过你这个问题，返回来的测序结果blast一下居然没有相似序列，可能上游或者下游序列有问题，产生了错配，虽然能扩出来东西，但是却是假阳性，我的AT值很高，开始用primerstar能扩出来几段，后来说啥也扩不出来了， 换了tks gflex酶就能扩出来了，序列也对，我设计了一大盒引物，换酶后随机拿以前设计的引物都可以扩出来，建议你也试试，祝好。
赞一下 回复此楼
9楼2016-02-12 11:32:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:10
一般超过2000长度的，首选Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase。 其扩增效率高，错误率极低，或许能够解决你的问题

关于测序，最好克隆到载体内去测序，测序结果来说，2000bp都什么没比对上很奇怪，你就是乱打的数据都能比对上好多，对于你的描述更多可能是克隆的片段出现问题，并不是你要的东西。

重新在进行克隆测序，会有一些新的提示
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-28 19:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:21
一般两千的序列总能看出是啥东西，能扩出来也说明确定有吧，除非PCR出错。
赞一下 回复此楼
永远相信未知的总是美好的！
3楼2015-01-28 21:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:30
我觉得应该是pcr的问题，引物一般克隆岛t载的话都没问题，除非片段不对，有参考线粒体基因组吗。或者在别的物质同源性高不高
一般线粒体都是保守的不会比对不出啥东西
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-28 21:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:41 by 我的船我的海
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 285 求调剂 资源与环境 一志愿北京化工大学 +3 未名考生 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:04 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿211化学学硕310分求调剂 +8 努力奋斗112 2026-03-12 9/450 2026-03-13 15:41 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 土木第一志愿276求调剂，科研和技能十分丰富，求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭