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lxx707

金虫 (小有名气)

[求助] 求助:扩线粒体基因组全序,中间有一段怎么都扩不出来,不知道还能采取什么方法?已有5人参与

设计了不下20对引物了,有5对能扩出2000左右的片段,但一般测序不出来。拿去克隆,再测序。再不同公司做了比较,有一段2000bp两个公司做得一样,但是NCBI BLAST无结果。其他三段比对不想似,NCBI上也比不出任何东西。万能的亲们,请多多指教,多给注意,实在是太感谢了!
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:10
一般超过2000长度的,首选Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase。 其扩增效率高,错误率极低,或许能够解决你的问题

关于测序,最好克隆到载体内去测序,测序结果来说,2000bp都什么没比对上很奇怪,你就是乱打的数据都能比对上好多,对于你的描述更多可能是克隆的片段出现问题,并不是你要的东西。

重新在进行克隆测序,会有一些新的提示
2楼2015-01-28 19:15:28
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