应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：扩线粒体基因组全序，中间有一段怎么都扩不出来，不知道还能采取什么方法？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2589  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lxx707

金虫 (小有名气)

[求助] 求助：扩线粒体基因组全序，中间有一段怎么都扩不出来，不知道还能采取什么方法？ 已有5人参与

设计了不下20对引物了，有5对能扩出2000左右的片段，但一般测序不出来。拿去克隆，再测序。再不同公司做了比较，有一段2000bp两个公司做得一样，但是NCBI BLAST无结果。其他三段比对不想似，NCBI上也比不出任何东西。万能的亲们，请多多指教，多给注意，实在是太感谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-28 16:12:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:30
我觉得应该是pcr的问题，引物一般克隆岛t载的话都没问题，除非片段不对，有参考线粒体基因组吗。或者在别的物质同源性高不高
一般线粒体都是保守的不会比对不出啥东西
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-28 21:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:10
一般超过2000长度的，首选Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase。 其扩增效率高，错误率极低，或许能够解决你的问题

关于测序，最好克隆到载体内去测序，测序结果来说，2000bp都什么没比对上很奇怪，你就是乱打的数据都能比对上好多，对于你的描述更多可能是克隆的片段出现问题，并不是你要的东西。

重新在进行克隆测序，会有一些新的提示
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-28 19:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:21
一般两千的序列总能看出是啥东西，能扩出来也说明确定有吧，除非PCR出错。
赞一下 回复此楼
永远相信未知的总是美好的！
3楼2015-01-28 21:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxx707

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by logowang at 2015-01-28 19:15:28
一般超过2000长度的，首选Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase。 其扩增效率高，错误率极低，或许能够解决你的问题

关于测序，最好克隆到载体内去测序，测序结果来说，2000bp都什么没比对上很奇怪，你就 ...

克隆会出现什么样的问题？不管怎样？现有的数据库是不是应该都能比对到一点？
赞一下 回复此楼
5楼2015-08-26 16:23:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程302分求调剂 +10 zyx上岸！ 2026-04-04 10/500 2026-04-06 22:49 by chenzhimin
[考研] 327考研调剂推荐 +6 呜呜呜呜呢 2026-04-06 6/300 2026-04-06 21:39 by 啵啵啵0119
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-05 4/200 2026-04-06 12:29 by 中飞院空管学院�
[考研] 0703求调剂383分 +9 W55j 2026-04-03 9/450 2026-04-06 06:50 by houyaoxu
[考研] 327求调剂 +4 拾光任染 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:16 by 南航~万老师
[考研] 312求调剂 +3 Say Never 2026-04-04 3/150 2026-04-05 11:19 by guoweigw
[考研] 342求调剂 +3 Liang7111 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:47 by dongzh2009
[考研] 一志愿南农090401，268，求调剂 +5 一木鸟然 2026-04-04 5/250 2026-04-04 17:07 by babysonlkd
[考研] 复试调剂 +6 范根培 2026-04-04 6/300 2026-04-04 14:27 by 土木硕士招生
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 材料科学与工程考研 +10 拯救皮特托先生 2026-04-02 10/500 2026-04-03 23:57 by userper
[考研] 考研调剂 +3 15615482637 2026-04-03 3/150 2026-04-03 22:50 by ms629
[考研] 350一志愿北京航空航天大学08500材料科学与工程求调剂 +5 kjnasfss 2026-04-03 5/250 2026-04-03 22:29 by 无际的草原
[考研] 274求调剂 +9 顺理成张 2026-04-03 10/500 2026-04-03 15:10 by 啊俊！
[考研] 考研调剂 +3 李木子0120 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:45 by dongzh2009
[考研] 求调剂 302分初试 0854 +5 伶可乐 2026-04-02 5/250 2026-04-02 17:53 by 笔落锦州
[考研] 307分求调剂 +14 (o~o) 2026-03-31 15/750 2026-04-01 20:43 by longlotian
[考研] 379求调剂 +3 ?苦瓜不苦 2026-04-01 3/150 2026-04-01 20:09 by 暮云清寒
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭