应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助：扩线粒体基因组全序，中间有一段怎么都扩不出来，不知道还能采取什么方法？
51/1返回列表
查看: 2749  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lxx707

金虫 (小有名气)

[求助] 求助：扩线粒体基因组全序，中间有一段怎么都扩不出来，不知道还能采取什么方法？ 已有5人参与

设计了不下20对引物了，有5对能扩出2000左右的片段，但一般测序不出来。拿去克隆，再测序。再不同公司做了比较，有一段2000bp两个公司做得一样，但是NCBI BLAST无结果。其他三段比对不想似，NCBI上也比不出任何东西。万能的亲们，请多多指教，多给注意，实在是太感谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-28 16:12:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

徐官冲123

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 978835147 at 2015-11-17 19:58:49
找到原因了吗？我现在也是这个问题，每次都能扩出来，且很单一，很亮，大小也一致，但是每次测序结果都不是，不管是克隆，还是PCR，且每次的测序结果都不一样。很奇怪啊。

换酶重新扩，这个可能是假阳性，上下游并没有真正结合在一起
赞一下 回复此楼
10楼2016-02-12 11:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:10
一般超过2000长度的，首选Phusion® High-Fidelity DNA Polymerase。 其扩增效率高，错误率极低，或许能够解决你的问题

关于测序，最好克隆到载体内去测序，测序结果来说，2000bp都什么没比对上很奇怪，你就是乱打的数据都能比对上好多，对于你的描述更多可能是克隆的片段出现问题，并不是你要的东西。

重新在进行克隆测序，会有一些新的提示
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-28 19:15:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:21
一般两千的序列总能看出是啥东西，能扩出来也说明确定有吧，除非PCR出错。
赞一下 回复此楼
永远相信未知的总是美好的！
3楼2015-01-28 21:08:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
lxx707(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:30
我觉得应该是pcr的问题，引物一般克隆岛t载的话都没问题，除非片段不对，有参考线粒体基因组吗。或者在别的物质同源性高不高
一般线粒体都是保守的不会比对不出啥东西
赞一下 回复此楼
4楼2015-01-28 21:18:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 20/1000 2026-08-09 16:39 by zxy7909
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:19 by oEVWOejN9taj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:47 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭