| 查看: 12257 | 回复: 10 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
空谈误国金虫 (正式写手)
潜龙勿用
|
[求助]
qRT-PCR模板量应该加多少？已有4人参与
|
|
|
我模板cDNA不稀释加 2ul，目的基因CT值35,36,37（平行性一点不好）.。。。.β-actin的ct值是18（三个复孔相差0.3以内）. 内参挺好说明不是操作的问题，我在想是不是目的基因表达量低，我应该提高模板量至4ul? 但是，我突然想到是不是我模板量加多了导致目的基因CT值不稳定？请问模板量过高会产生这样的不利影响吗？ 还是说我应该把模板量提高到4ul，6ul试试？ |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有60人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
空谈误国
金虫 (正式写手)
潜龙勿用
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 833
- 散金: 115
- 帖子: 427
- 在线: 70.9小时
- 虫号: 2558636
- 注册: 2013-07-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫识别/免疫耐受/免疫调
11楼2016-03-31 11:01:54
2楼2015-01-28 16:32:59
空谈误国
金虫 (正式写手)
潜龙勿用
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 833
- 散金: 115
- 帖子: 427
- 在线: 70.9小时
- 虫号: 2558636
- 注册: 2013-07-22
- 性别: GG
- 专业: 免疫识别/免疫耐受/免疫调
3楼2015-01-28 18:17:10
【答案】应助回帖
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
空谈误国(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:04:38
感谢参与，应助指数 +1
空谈误国(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:04:38
|
一，ct超过32以上就一般不能使用了，问题可能为目的基因表达太低，你可以用普通pcr检测以下你的摸板，是否有基因表达并且引物是否有dimer。确定过后才可上机。 二，内参的选择，你选择的内参在你的实验里显然已经不太适用了，需要重新选择内参，具体你需要查阅文献了，并不是一个内参用到底，不同的实验有不同的要求，你需要一个表达量低的内参 基因，并且控制你的内参和你的目的基因的ct值在10以内（也就是说一个内参高过20，目的低过30。） 这样数值才可靠。 三，最好不要更改体系，变换摸班浓度以稀释为主，不要增添。 |
4楼2015-01-28 19:04:33