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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » mtDNA PCR 无条带
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刺角魔蜥

银虫 (初入文坛)

[求助] mtDNA PCR 无条带 已有2人参与

提取方法，PCR体系跟师姐用的一样，开始电泳跑出来有拖尾，二聚体也有，还跑出来过一次（扩增基因约800bp）；最近几次什么都没有了，试剂程序都没变，不知道哪里出的错误。同时师姐也在做，她做的有成功。提取方面有一些问题，单个休眠卵的mtDNA提取成功率不很高，想请教一下PCR方面是不是有问题呢？下面附图

mtDNA PCR 无条带
最开始做得


mtDNA PCR 无条带-1
唯一一次跑出条带的（红圈）中


mtDNA PCR 无条带-2
最近做


mtDNA PCR 无条带-3
师姐用她的那一套试剂帮我做的一次PCR


mtDNA PCR 无条带-4
最近做
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1楼 2015-01-28 11:35:17
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
线粒体重提吧，那个第一张图后面的是什么样品，是十个里面P出过一个吗？
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-28 11:51:39
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
刺角魔蜥: 金币+6, ★★★很有帮助 2015-01-28 14:16:20
我的感觉是，虽然有一次跑出来了，但是条带的量明显还是很少的，说明扩增的条件还是需要改进的，从模板、引物及他们的浓度，体系中的酶（普通Taq，Hot start Taq）、扩增条件、操作的规范性等分析，不难得出结论。
赞一下 回复此楼
todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-28 11:51:52
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