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刺角魔蜥

银虫 (初入文坛)

[求助] mtDNA PCR 无条带 已有2人参与

提取方法,PCR体系跟师姐用的一样,开始电泳跑出来有拖尾,二聚体也有,还跑出来过一次(扩增基因约800bp);最近几次什么都没有了,试剂程序都没变,不知道哪里出的错误。同时师姐也在做,她做的有成功。提取方面有一些问题,单个休眠卵的mtDNA提取成功率不很高,想请教一下PCR方面是不是有问题呢?下面附图

mtDNA PCR 无条带
最开始做得


mtDNA PCR 无条带-1
唯一一次跑出条带的(红圈)中


mtDNA PCR 无条带-2
最近做


mtDNA PCR 无条带-3
师姐用她的那一套试剂帮我做的一次PCR


mtDNA PCR 无条带-4
最近做
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Evertried.Everfailed.Nomatter.Tryagain.Failagain.Failbetter
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
线粒体重提吧,那个第一张图后面的是什么样品,是十个里面P出过一个吗?
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-01-28 11:51:39
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
刺角魔蜥: 金币+6, ★★★很有帮助 2015-01-28 14:16:20
我的感觉是,虽然有一次跑出来了,但是条带的量明显还是很少的,说明扩增的条件还是需要改进的,从模板、引物及他们的浓度,体系中的酶(普通Taq,Hot start Taq)、扩增条件、操作的规范性等分析,不难得出结论。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-28 11:51:52
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