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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 植物生理研究中的蛋白免疫印迹
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)

[求助] 植物生理研究中的蛋白免疫印迹 已有3人参与

在做药理实验中，用药物刺激细胞后提取蛋白，为了检测某个蛋白量的多少或者是否被磷酸化激活，可以采用Western blotting 来从检测复杂样品中的某种蛋白，可是做植物生理的时候如果想检测某个蛋白是否被磷酸化或者蛋白量发生变化能用Western blotting 么？我看很多文献上都有用，可是这些特异性的一抗和二抗要怎么选择和购买呢？好像许多抗体都是针对动物细胞的吧？如果不可以的话是不是可以用蛋白质组学的方法来检测某种蛋白是不是有含量变化
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我努力，我坚持，我成功！
1楼 2015-01-27 13:22:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2015-01-27 21:19:22
再请教一下：1）我今天看文献，许多关于生理机制研究都会用到各种目的基因突变植株，请问这些植株是自己培育的还是也有专门卖的啊？2）实验中会分别用原生质体和植株进行试验，这里是不是分别代表细胞水平和整体水 ...

拟南芥突变植株去TAIR上查，可以订购种子
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5楼2015-01-27 22:29:02
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七夕小巫

金虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:09:50
如果选择抗体比较麻烦，可以考虑用目标蛋白质组的技术去检测磷酸化，定量和定性都方便。 MRM技术 被认为是基于质谱的ELISA技术，非常适合这种实验。你要感兴趣做可以站内联系给我。
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8楼2015-01-28 14:03:35
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logowang

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-28 22:10:20
引用回帖:
6楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2015-01-28 09:55:56
我是药学的，对植物生理这方面不是很了解，最近看这方面的文献有些费力还望指点：图片RbohD中的上标S39A等是代表什么意思呢？还有下面的分组L2，L3也分别单表什么意思呢？
文章标题The FLS2-Associated Kinase BI ...

s39a  或者 s343a 可能是点突变， 具体需要你看看文章中怎么说了。对于l1 l2 l3不是特别理解， 但感觉不一定是 第几代， 因为出现了l5  ， 一般情况不会利用第五代转基因植物的，看起来更像是不同的treatment， 很抱歉没办法花时间去读你的文章，不过相信你能弄明白的。
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11楼2015-01-28 18:30:38
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普通回帖

xzhw

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-27 21:46:27
当然可以。有个专门卖植物抗体的公司瑞典的Agrisera，有些抗体买不到可以自己表达抗原，然后送公司去免疫动物，得到抗体。
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2楼2015-01-27 20:11:18
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xzhw at 2015-01-27 20:11:18
当然可以。有个专门卖植物抗体的公司瑞典的Agrisera，有些抗体买不到可以自己表达抗原，然后送公司去免疫动物，得到抗体。

再请教一下：1）我今天看文献，许多关于生理机制研究都会用到各种目的基因突变植株，请问这些植株是自己培育的还是也有专门卖的啊？2）实验中会分别用原生质体和植株进行试验，这里是不是分别代表细胞水平和整体水平啊？
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3楼2015-01-27 21:19:22
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logowang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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xujingyuanxu: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-01-28 09:46:47
抗体问题可以解决，麻烦的是家族蛋白的抗体，不容易得到。

mutant lines是一个实验室宝贵的资源财富，是几带博士们辛勤劳作的成果，没错，一般情况下这些植株都是自己实验室培育的，所以说优秀的平台会给你的工作上一个决定性的台阶。

对于实验材料的选择，要从自己实验出发，你的理解是正确的，但是一定注意所用的细胞系的来源。
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4楼2015-01-27 22:12:03
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by logowang at 2015-01-27 22:12:03
抗体问题可以解决，麻烦的是家族蛋白的抗体，不容易得到。

mutant lines是一个实验室宝贵的资源财富，是几带博士们辛勤劳作的成果，没错，一般情况下这些植株都是自己实验室培育的，所以说优秀的平台会给你的工作 ...

我是药学的，对植物生理这方面不是很了解，最近看这方面的文献有些费力还望指点：图片RbohD中的上标S39A等是代表什么意思呢？还有下面的分组L2，L3也分别单表什么意思呢？
文章标题The FLS2-Associated Kinase BIK1 Directly Phosphorylates the NADPH Oxidase RbohD to Control Plant Immunity 谢谢！
植物生理研究中的蛋白免疫印迹
3.png
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6楼2015-01-28 09:55:56
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by starseacow at 2015-01-27 22:29:02
拟南芥突变植株去TAIR上查，可以订购种子...

我是药学的，对植物生理这方面不是很了解，最近看这方面的文献有些费力还望指点：图片RbohD中的上标S39A等是代表什么意思呢？还有下面的分组L2，L3也分别单表什么意思呢？还有CoIP得到的蛋白再用WB的方法来跑的话是不是还要再用一抗和二抗呢，怎么选择呢？
文章标题The FLS2-Associated Kinase BIK1 Directly Phosphorylates the NADPH Oxidase RbohD to Control Plant Immunity 谢谢！
植物生理研究中的蛋白免疫印迹-1
3.png
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7楼2015-01-28 09:57:55
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starseacow

专家顾问 (职业作家)
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7楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2015-01-28 09:57:55
我是药学的，对植物生理这方面不是很了解，最近看这方面的文献有些费力还望指点：图片RbohD中的上标S39A等是代表什么意思呢？还有下面的分组L2，L3也分别单表什么意思呢？还有CoIP得到的蛋白再用WB的方法来跑的话是 ...

没看具体文章
S39A指氨基酸点突变
L2，L3指第二代第三代？！不确定
做western还是得用抗体
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
9楼2015-01-28 17:14:22
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by starseacow at 2015-01-28 17:14:22
没看具体文章
S39A指氨基酸点突变
L2，L3指第二代第三代？！不确定
做western还是得用抗体...

谢谢大神！！！！
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10楼2015-01-28 17:59:04
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