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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 生物制药 » TSKgel凝胶色谱柱一般用什么做流动相
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zhiyao2034

铁虫 (小有名气)

[求助] TSKgel凝胶色谱柱一般用什么做流动相 已有1人参与

用的是TSKgel 3000PWXL凝胶色谱柱，由于是第一次用这个柱子，测聚合物的分子量。
  标准品用的是聚乙二醇（PEG）。。
  测得样品分子量大概在4000左右，不知道用什么做流动相好。。
   说明书上写超纯水可以做流动相，有文献报道用磷酸二氢钠也可以。。
   而且楼主也不知道用标准品做标曲是怎么一个步骤
   求高手指点迷津啊、、、、、
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1楼 2015-01-26 20:29:49
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zhiyao2034

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangsl112 at 2015-02-28 19:16:08
流动相一般为；磷酸二氢钠+氯化钠缓冲溶液或者磷酸二氢钠+硝酸钠缓冲溶液。如果被测物质不带电荷，貌似直接用水应该也可以。（注意被测物质必须为水溶性的）
标曲的做法：进样一系列不同分子量的的标品（从大到小或 ...

首先谢谢你的回答。标曲用的是标品，水为流动相。
但是我们得到的样品是生物发酵得来的聚合物，会有一些杂质，比如说钙盐。这种情况需要纯化过后再进样吗？
纯化的过程自然需要一些步骤，想的是不用纯化就好了。当然这只是想想，能否给一些建议呢》？
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3楼2015-04-05 19:08:21
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zhangsl112

木虫 (正式写手)

特级潜水员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhiyao2034: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-04-05 19:08:30
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2015-04-06 11:09:17
流动相一般为；磷酸二氢钠+氯化钠缓冲溶液或者磷酸二氢钠+硝酸钠缓冲溶液。如果被测物质不带电荷，貌似直接用水应该也可以。（注意被测物质必须为水溶性的）
标曲的做法：进样一系列不同分子量的的标品（从大到小或者从小到大），得到一系列不同的色谱峰保留时间，（分子量大的保留时间越小），最终得到一个分子量与保留时间相关的标曲。
被测物质的分子量检测：进样被测物质，将得到的保留时间打入到标曲中，即得到被测物质的分子量。
注意：被测物质及标准品的分子量必须在所用型号色谱柱的排阻范围。

长期在水区混，突然来答题码这么多字好累啊！
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初来乍到，请多关照
2楼2015-02-28 19:16:08
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zhangsl112

木虫 (正式写手)

特级潜水员
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhiyao2034 at 2015-04-05 19:08:21
首先谢谢你的回答。标曲用的是标品，水为流动相。
但是我们得到的样品是生物发酵得来的聚合物，会有一些杂质，比如说钙盐。这种情况需要纯化过后再进样吗？
纯化的过程自然需要一些步骤，想的是不用纯化就好了。 ...

发酵液一般都比较脏吧！如果只是一些无机盐，应该不会有啥影响！就怕其他杂质长时间直接上样会堵塞柱前端，一些强保留物质会污染柱填料。最好是将样品纯化，如果不想纯化或者嫌纯化麻烦的话，建议：1样品上样前采用0.22或0.45微米注射滤头过滤，注意区分滤头分水系和有机系；2色谱柱前接上保护柱，使用的时候，注意柱压是否上升，一段时间后，如果柱压上升，更换保护柱里面的柱芯！

顺便话一句，生物发酵的话，你的样品是不是蛋白类的？如果你的样品是蛋白的话，建议流动相还是采用缓冲盐溶液体系吧，最好不要直接用水做流动相！
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初来乍到，请多关照
4楼2015-04-06 12:46:33
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