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zhiyao2034

铁虫 (小有名气)

[求助] TSKgel凝胶色谱柱一般用什么做流动相 已有1人参与

用的是TSKgel 3000PWXL凝胶色谱柱,由于是第一次用这个柱子,测聚合物的分子量。
  标准品用的是聚乙二醇(PEG)。。
  测得样品分子量大概在4000左右,不知道用什么做流动相好。。
   说明书上写超纯水可以做流动相,有文献报道用磷酸二氢钠也可以。。
   而且楼主也不知道用标准品做标曲是怎么一个步骤
   求高手指点迷津啊、、、、、
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zhangsl112

木虫 (正式写手)

特级潜水员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zhiyao2034: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-04-05 19:08:30
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2015-04-06 11:09:17
流动相一般为;磷酸二氢钠+氯化钠缓冲溶液或者磷酸二氢钠+硝酸钠缓冲溶液。如果被测物质不带电荷,貌似直接用水应该也可以。(注意被测物质必须为水溶性的)
标曲的做法:进样一系列不同分子量的的标品(从大到小或者从小到大),得到一系列不同的色谱峰保留时间,(分子量大的保留时间越小),最终得到一个分子量与保留时间相关的标曲。
被测物质的分子量检测:进样被测物质,将得到的保留时间打入到标曲中,即得到被测物质的分子量。
注意:被测物质及标准品的分子量必须在所用型号色谱柱的排阻范围。

长期在水区混,突然来答题码这么多字好累啊!
初来乍到,请多关照
2楼2015-02-28 19:16:08
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zhiyao2034

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangsl112 at 2015-02-28 19:16:08
流动相一般为;磷酸二氢钠+氯化钠缓冲溶液或者磷酸二氢钠+硝酸钠缓冲溶液。如果被测物质不带电荷,貌似直接用水应该也可以。(注意被测物质必须为水溶性的)
标曲的做法:进样一系列不同分子量的的标品(从大到小或 ...

首先谢谢你的回答。标曲用的是标品,水为流动相。
但是我们得到的样品是生物发酵得来的聚合物,会有一些杂质,比如说钙盐。这种情况需要纯化过后再进样吗?
纯化的过程自然需要一些步骤,想的是不用纯化就好了。当然这只是想想,能否给一些建议呢》?
3楼2015-04-05 19:08:21
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zhangsl112

木虫 (正式写手)

特级潜水员

引用回帖:
3楼: Originally posted by zhiyao2034 at 2015-04-05 19:08:21
首先谢谢你的回答。标曲用的是标品,水为流动相。
但是我们得到的样品是生物发酵得来的聚合物,会有一些杂质,比如说钙盐。这种情况需要纯化过后再进样吗?
纯化的过程自然需要一些步骤,想的是不用纯化就好了。 ...

发酵液一般都比较脏吧!如果只是一些无机盐,应该不会有啥影响!就怕其他杂质长时间直接上样会堵塞柱前端,一些强保留物质会污染柱填料。最好是将样品纯化,如果不想纯化或者嫌纯化麻烦的话,建议:1样品上样前采用0.22或0.45微米注射滤头过滤,注意区分滤头分水系和有机系;2色谱柱前接上保护柱,使用的时候,注意柱压是否上升,一段时间后,如果柱压上升,更换保护柱里面的柱芯!

顺便话一句,生物发酵的话,你的样品是不是蛋白类的?如果你的样品是蛋白的话,建议流动相还是采用缓冲盐溶液体系吧,最好不要直接用水做流动相!
初来乍到,请多关照
4楼2015-04-06 12:46:33
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