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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 微量紫外分光光度计
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xiaomeng12

银虫 (正式写手)

[求助] 微量紫外分光光度计

前段日子实验室买了微量紫外分光光度计，发现比色皿模式与微量模式测出来的DNA浓度与OD值相差很大，请问是什么原因啊？
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1楼 2015-01-18 22:41:39
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xiaomeng12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-01-19 09:28:23
检查一下pathlength是不是一样

比方说用比色皿测OD值在1.53，浓度为70ng/ul，但是用微量模式OD值在3.01，浓度为300ng/ul，请问应该相信哪个数值啊？
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3楼2015-01-21 19:18:14
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaomeng12: 金币+10, ★有帮助 2015-01-21 19:18:24
检查一下pathlength是不是一样
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2015-01-19 09:28:23
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-22 16:44:36
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiaomeng12 at 2015-01-20 23:18:14
比方说用比色皿测OD值在1.53，浓度为70ng/ul，但是用微量模式OD值在3.01，浓度为300ng/ul，请问应该相信哪个数值啊？...

对于1 cm的光程，双链DNA浓度=OD260*50  比色皿大多都是1cm光程，所以1.5对应70ng/ul差不多
微量模式我只能假设你那个光程是0.5 cm所以算出来的浓度是300
至于两个数字应该相信哪一个，只凭这些信息也没法判断, 反正肯定有一个是错的没跑了
常见的产生差异的可能原因：
1. 比色皿或者测量的容器本身有吸收，比如你用聚苯乙烯塑料做的比色皿或96孔板而不是石英的话，这些塑料就在OD260有吸收
2. 背景没有做校正
3. 测量的值饱和了，不在线性区间内，这个你就要自己翻一翻说明书或者做个标准曲线看一看
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xiaomeng12
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2015-01-22 10:23:20
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xiaomeng12

银虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2015-01-22 10:23:20
对于1 cm的光程，双链DNA浓度=OD260*50  比色皿大多都是1cm光程，所以1.5对应70ng/ul差不多
微量模式我只能假设你那个光程是0.5 cm所以算出来的浓度是300
至于两个数字应该相信哪一个，只凭这些信息也没法判断,  ...

你分析地很有道理，的确是超出线性范围了，问了厂家他们说这个比色皿最大能测量的值是70ng
但是按照微量模式测定的数值OD260／280和260／230均在3点多，是否代表提取的DNA降解或者有RNA污染，如果以这个数值提取出来的DNA为模版进行几个20kb大小基因的PCR，还能P的出来嘛？
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5楼2015-01-22 22:23:46
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