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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

[求助] 我的cDNA.你在哪,怎么千呼万唤不出来 已有5人参与

用玉米幼苗提的RNA,反转录成CDNA.跑PCR一直没有条带,换了酶和温度梯度,还是不得行!恳求各位大师指点,小女子在此跪谢了。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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快乐农夫

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
涅槃之曦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:31:39
跑内参了吗?cDNA一般不太容易降解的,我13年九月份反转录的昨天还拿来扩基因,一点问题没有。这个一般出问题主要出在提RNA的环节上
6楼2015-01-16 09:52:37
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晞朔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-17 19:48:43
看来做玉米遇到难题的真不少啊。请问你的cDNA质量如何?有用Actin检测一下吗?如果cDNA质量好,那就需要优化体系去扩增你需要的目的基因了。
2楼2015-01-16 08:34:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
涅槃之曦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:31:23
得到cDNA之后是否在短时间内就进行PCR了呢?如果酶和温度都尝试过的话,确认模板是否降解了,引物设计的是否合理。(反转录时的反转录酶也很重要的)
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-16 09:07:14
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涅槃之曦

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 晞朔 at 2015-01-16 08:34:00
看来做玉米遇到难题的真不少啊。请问你的cDNA质量如何?有用Actin检测一下吗?如果cDNA质量好,那就需要优化体系去扩增你需要的目的基因了。

CDNA质量还可以,元旦节提的,难道是降解了

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2015-01-16 09:44:21
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