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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR 已有10人参与

各位大神，我最近在做定量PCR，是个新手，遇到了一些问题，拜托各位指点！我的实验扩增曲线没有出现平台期，请问这是怎么回事？

定量PCR
扩增曲线.jpg


定量PCR-1
熔解曲线.jpg
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1楼 2015-01-15 12:46:01
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
悠悠飘杨: 金币+5, ★有帮助 2015-01-22 08:53:12
提一些改进建议：第一，增加模板加入的量，第二扩大反应体系；第三；增加5个循环，不要担心引物二聚体的出现，根据你的结果来看，顶多是阴性对照出现二聚体，只要你的样本没有出现双峰就没问题；第四；添加一些DMSO等增强剂（也能改善引物二聚体情况），注意同时增加引物加入量；第五，采用好一点的试剂盒。祝好
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14楼2015-01-21 11:54:13
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:06:34
明显循环数太少，才35个，曲线刚刚抬头还没到平台期，建议增加循环数到45个。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-01-15 13:02:54
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-15 13:02:54
明显循环数太少，才35个，曲线刚刚抬头还没到平台期，建议增加循环数到45个。

但是循环数增加后会出现非特异性扩增
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3楼2015-01-15 13:29:50
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494118250

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:06:53
模板浓度太低了，建议减少稀释倍数
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4楼2015-01-15 13:30:31
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