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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR 已有10人参与

各位大神,我最近在做定量PCR,是个新手,遇到了一些问题,拜托各位指点!我的实验扩增曲线没有出现平台期,请问这是怎么回事?

定量PCR
扩增曲线.jpg


定量PCR-1
熔解曲线.jpg
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
悠悠飘杨: 金币+5, 有帮助 2015-01-22 08:53:12
提一些改进建议:第一,增加模板加入的量,第二扩大反应体系;第三;增加5个循环,不要担心引物二聚体的出现,根据你的结果来看,顶多是阴性对照出现二聚体,只要你的样本没有出现双峰就没问题;第四;添加一些DMSO等增强剂(也能改善引物二聚体情况),注意同时增加引物加入量;第五,采用好一点的试剂盒。祝好
14楼2015-01-21 11:54:13
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huangchj03

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by 悠悠飘杨 at 2015-01-16 08:59:41
我的样品没有稀释过,样品的浓度本身就很低,我用的是DNA,公司里的技术支持跟我说,如果超过35个循环,在35至40个循环内,很有可能出现非特异性扩增,这时候只要减少循环数,就可以解除这种现象,而且老师也不建议 ...

只要你的样本扩增没有引物二聚体情况,数据就可靠,不要担心这个问题,改进的方法有很多种,参考我给你的意见
15楼2015-01-21 11:55:44
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