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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR 已有10人参与

各位大神，我最近在做定量PCR，是个新手，遇到了一些问题，拜托各位指点！我的实验扩增曲线没有出现平台期，请问这是怎么回事？

定量PCR
扩增曲线.jpg


定量PCR-1
熔解曲线.jpg
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1楼 2015-01-15 12:46:01
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 懒蛋 at 2015-01-16 00:47:46
Nice melting curve.

For no stationary phase:

1. Increase PCR cycle
2. Decrease sample dilution. Are you working with cDNA/gDNA/plasmid/RNA/PCR fragment as template?
3. You said if you increa ...

我的样品没有稀释过，样品的浓度本身就很低，我用的是DNA，公司里的技术支持跟我说，如果超过35个循环，在35至40个循环内，很有可能出现非特异性扩增，这时候只要减少循环数，就可以解除这种现象，而且老师也不建议循环数过高的定量PCR。
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11楼2015-01-16 08:59:41
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:06:34
明显循环数太少，才35个，曲线刚刚抬头还没到平台期，建议增加循环数到45个。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2015-01-15 13:02:54
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悠悠飘杨

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-15 13:02:54
明显循环数太少，才35个，曲线刚刚抬头还没到平台期，建议增加循环数到45个。

但是循环数增加后会出现非特异性扩增
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3楼2015-01-15 13:29:50
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494118250

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:06:53
模板浓度太低了，建议减少稀释倍数
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4楼2015-01-15 13:30:31
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