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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 微米和纳米 » 学术讨论 » 金纳米粒子吸附DNA操作顺序
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梦回年少

木虫 (正式写手)

[求助] 金纳米粒子吸附DNA操作顺序 已有2人参与

各位虫友：
    我在做金纳米粒子上以poly A为锚，吸附DNA，但对加料顺序不是很确定，现在做的是金纳米溶液和DNA混，孵育后，再加PBS（不含NaCl），再孵育一段时间，并逐步加浓的NaCl溶液至所需浓度。但从紫外上看吸收峰峰强会降低很多。是不是加料顺序有问题？各位都是怎么操作的呢？金纳米在溶液中稳定存在、且DNA吸附效果较好的的NaCl浓度是多少呢？DNA吸附量降低是否要相应降低NaCl的浓度？
    还有就是想问一下大家，吸收峰位置的变化到底是由粒径变化导致的，还是吸附后介电常数发生变化导致的，或者两者兼而有之？
    老师也没做过这块，希望各位做这个方向的虫友帮帮忙，先谢谢大家了~
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1楼 2015-01-13 21:26:31
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
50~60 mM NaCl 可以吸附得比较好。把DNA先加到盐溶液里，再加纳米金。
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2楼2015-01-14 21:57:11
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梦回年少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2015-01-14 21:57:11
50~60 mM NaCl 可以吸附得比较好。把DNA先加到盐溶液里，再加纳米金。

谢谢~我看文献里是可以做到300mM重悬的，也有说是先加完PBS（不含NaCl），之后逐步加盐的，说是屏蔽电荷，降低DNA间的静电排斥，可以使吸附量增大。您说50~60 mM可以吸附的很好，那吸附量是足够大的么？DNA加到盐溶液里是一步都加进去？
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3楼2015-01-15 15:55:59
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
梦回年少: 金币+5 2015-01-15 21:32:52
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦回年少 at 2015-01-15 15:55:59
谢谢~我看文献里是可以做到300mM重悬的，也有说是先加完PBS（不含NaCl），之后逐步加盐的，说是屏蔽电荷，降低DNA间的静电排斥，可以使吸附量增大。您说50~60 mM可以吸附的很好，那吸附量是足够大的么？DNA加到盐溶 ...

其实吸附过程影响因素很多，DNA的长度、纳米金的大小、溶液的pH都会造成影响。据我所知，如果是用氯金酸和柠檬酸合成的纳米金，粒径大小在13nm左右，DNA的长度为12-mer，pH 7.6，在这种条件下，50~60 mM NaCl基本就吸附饱和了。pH越低、盐浓度越高，吸附越容易。DNA越长吸附越慢，但吸附后解吸也越难。
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4楼2015-01-15 18:42:58
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
DNA是一次性加到盐溶液里的。
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5楼2015-01-15 18:47:03
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梦回年少

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 逍潇 at 2015-01-15 18:42:58
其实吸附过程影响因素很多，DNA的长度、纳米金的大小、溶液的pH都会造成影响。据我所知，如果是用氯金酸和柠檬酸合成的纳米金，粒径大小在13nm左右，DNA的长度为12-mer，pH 7.6，在这种条件下，50~60 mM NaCl基本就 ...

我是准备做不同poly A长度的，加上spacer和probe，总共最短的也要有43-mer，这种条件下是不是考虑要增大盐浓度以增加吸附效率，一次加的盐浓度是不是不可以太高？
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6楼2015-01-15 21:39:36
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 梦回年少 at 2015-01-15 21:39:36
我是准备做不同poly A长度的，加上spacer和probe，总共最短的也要有43-mer，这种条件下是不是考虑要增大盐浓度以增加吸附效率，一次加的盐浓度是不是不可以太高？...

可以适当增大盐浓度，但一般来说，大到一定程度再增加就没有什么意义了，你可以做个实验看看最大吸附时的盐浓度大概是多少，盐浓度太高也不好，会引起纳米金的沉淀，这可能与我们是直接把纳米金加到DNA盐溶液里有关。另外可以降低溶液的pH，这个效果很好。你自己也可以把加料顺序改变下看看效果，别人怎么说都不如你自己试下好。
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7楼2015-01-16 16:05:25
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fujian409

银虫 (小有名气)
上海物理所的樊春海在JACS 上发过一篇这样的文章，你可以参考下。但是从我们重复的效果来看，没有他文章中说的那么好。
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8楼2015-01-16 16:30:08
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fujian409

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2015-01-14 21:57:11
50~60 mM NaCl 可以吸附得比较好。把DNA先加到盐溶液里，再加纳米金。

这样做是不行的，纳米金立马就会聚集。
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9楼2015-01-16 16:31:11
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by fujian409 at 2015-01-16 16:31:11
这样做是不行的，纳米金立马就会聚集。...

用50 mM还好，再高了聚集明显。我做的初期目的只是看看纳米金在某个条件下DNA吸附的快慢和多少。
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10楼2015-01-16 18:43:41
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