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keven7928

至尊木虫 (知名作家)

水手

[求助] 求核酸染料有哪些? 已有4人参与

最近在做基因传递的试验,用激光共聚焦观察材料和基因的胞内轨迹,想用YOYO1标记DNA,RhB标记材料,但是YOYO1太贵了,买不起,还有其他可以用的染料吗?
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坚持到底就是胜利
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keven7928

至尊木虫 (知名作家)

水手

非常感谢,我想找一些做细胞实验,能染外源核酸的染料
坚持到底就是胜利
3楼2015-01-09 12:05:08
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查看全部 6 个回答

hyuqing

捐助贵宾 (小有名气)

Enriching beads


【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
keven7928: 金币+2, 有帮助 2015-01-09 12:04:12
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:35:16
电泳后,核酸需经染色才能显色出带型,常用以下核酸染色剂:
1、溴化乙锭(ethidium bromide, EB)
最常用的核酸荧光染料,可嵌入核酸双链的配对碱基之间,在紫外线激发下,发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光,比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍,因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深,可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCl2中5min,使非结合的EB褪色,这 样可检查到10ng的DNA样品,EB也可用于检测单链DNA或RNA,但其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率也相对较低。
在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB,染色可在电泳过程中进行,能随时观察核酸的迁移情况。但EB带正电荷,嵌入碱基后增加了 核酸分子的刚性,使迁移率减慢,故不宜用于测定核酸分子量的大小,这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光 易分解,应于4℃避光保存,
2、吖啶橙(acridine orange, AO):
吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间,在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光;还通过静电与单链核酸的磷酸基结合,在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸,灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格,应在 22℃,0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.0)中避光浸泡30min,然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。
3、银(Ag+)试剂:
Ag+与核酸形成稳定复合物,然后用甲醛使Ag+还原成银颗粒。AgNO3等试剂可使聚丙烯酰胺凝胶上的单链,双链DNA及 RNA都染成黑褐色。银染法的灵敏度比EB染色高200倍左右,比亚甲蓝染色高100~1000倍,在小于0.5mm厚的凝胶中,能检测出0.5ng的 RNA,其缺点是专一性不强,能与蛋白质,去污剂反应也产生褐色,而且对DNA的染色定量不准确。银与DNA稳定结合,对DNA有破坏作用,不适于DNA 片段回收的制备。
4、亚甲蓝(methylene blue)
可将RNA染成蓝色,但灵敏度不高,而且操作时间长。染色过程:胶浸泡于0.02%的亚甲蓝,10mmol/L Tris-Ac(pH8.3),4℃放置1~2h,用净水洗5~8h(反复换水),带型肉眼可见,最低检测量为 250ng。
2楼2015-01-08 22:29:46
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-09 19:35:28
果断EB吧,价格便宜(不到其它染料的十分之一)就是致癌,我用过半年,小期,少量内用可以,不用了的话,哪些电泳槽都要酒精擦洗,一次性物品全部扔掉。
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-01-09 14:54:25
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genhunter

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以用Hoechst 33342
离成功还差一点
5楼2015-02-23 12:31:29
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