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PET28a 转化后不长菌 换pet32a 需要什么注意事项？ 已有1人参与
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最近构建重组质粒，将目的片段胶回收产物与pet28a 用Bamh I 和Hind III双酶切后 经T4 DNA ligase 连接 转化至DH5α感受态细胞中，涂卡纳抗性平板，发现不长菌啊？听别人说pet28a长得慢是这样吗？ 双酶切体系：胶回收产物12 ul ，Bamh I 0.75ul，Hind III 0.75ul， 10×Butter K 1.5ul 总计 15ul pet28a 6ul ，dd 水 2ul ，Bamh I 0.5 ul，Hind III 0.5ul ， 10×Butter K 1 ul，总计 10ul 将双酶切后的产物与per28a跑电泳，与未酶切的对比（确实切下来了），切胶回收，进行16℃过夜连接 连接体系：双酶切后的胶回收产物9ul， 双酶切后pet28a 3ul，T4 DNA Ligase 1.5 ul，10×T4 Butter 1.5 ul ，总计15ul 不知道这样的体系有没有问题？ 另外看论坛上有人说连接pet28a热击36秒即可，我热击的是60秒，有影响吗？ 引物设计的酶切 位点是Bamh I和Hind III， pet32a上也有这两个，我如果用换载体pet32a 需要注意什么呢？ 启动子方面注意什么？ |
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4楼2017-12-06 13:28:45
lihe131
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