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2013201621铁虫 (初入文坛)
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[求助]
5.8S和ITS1F这对引物做荧光定量土壤中的真菌的问题
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有没有虫友用5.8S和ITS1F这对引物做荧光定量,定量土壤中的真菌啊?我做的时候出现了奇怪的现象,用的染料是BIO-RAD 的iQ,仪器也是他家的CFX96,做标曲的质粒是从土壤样品中拿这对引物扩出来的条带,回收、克隆 。第一次做的时候标曲和样品熔解曲线单峰,在80度。后面再做的时候,标曲和样品竟然都双峰,80度和86度,还有一次样品都没扩出来。也试过提高退火温度,还是双峰啊。求有经验做过的小伙伴出来帮帮我啊。 |
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