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5.8S和ITS1F这对引物做荧光定量土壤中的真菌的问题
有没有虫友用5.8S和ITS1F这对引物做荧光定量，定量土壤中的真菌啊？我做的时候出现了奇怪的现象，用的染料是BIO-RAD 的iQ,仪器也是他家的CFX96，做标曲的质粒是从土壤样品中拿这对引物扩出来的条带，回收、克隆 。第一次做的时候标曲和样品熔解曲线单峰，在80度。后面再做的时候，标曲和样品竟然都双峰，80度和86度，还有一次样品都没扩出来。也试过提高退火温度，还是双峰啊。求有经验做过的小伙伴出来帮帮我啊。 |
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