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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 虫友们 有没有 转膜 击穿 PVDF膜的情况
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小小技术官

木虫 (正式写手)

[交流] 虫友们 有没有 转膜 击穿 PVDF膜的情况

100V 恒流（240mA左右）1h  冰上

Glycine 2.9g Tris 5.8g SDS 0.37g    200ml 甲醇 （预先配好的10×，稀释后加甲醇的）

今天转了两次， 第一次转完后，PVDF膜上没有maker ，在滤纸上反而隐约有。

以为是电极插反了。

随后做了第二次，确认电极连接正确，缩短转膜时间 40min，发现maker直接透过PVDF膜，到滤纸上了！！而且电转液是在转完后还是凉的，平时都是热的，冒热气那样。

感觉做了很多WB了，头一次这么让人费解。

求大神支招。
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生活是一面镜子，要笑着面对！
1楼 2014-12-16 22:53:03
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-17 11:30:29
我转膜不加SDS，不过大体步骤和楼主差不多
但是转膜蛋白会穿过PVDF膜并不稀奇。我以前放两张膜转膜试过，第二张膜上也能显出条带，只不过比第一张膜要浅很多
楼主marker都完全跑到滤纸上，这么夸张倒是从来没见过
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2014-12-17 01:39:46
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searush

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人觉得应该是转膜过头了   建议你80V  试试
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学术研究
3楼2014-12-17 09:10:56
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小小技术官

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-12-17 01:39:46
我转膜不加SDS，不过大体步骤和楼主差不多
但是转膜蛋白会穿过PVDF膜并不稀奇。我以前放两张膜转膜试过，第二张膜上也能显出条带，只不过比第一张膜要浅很多
楼主marker都完全跑到滤纸上，这么夸张倒是从来没见过 ...

嗯 今天转膜弄上他两张PVDF膜，再击穿就只能换电转液了，那么多10×电转液，可不能可惜了
谢谢
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生活是一面镜子，要笑着面对！
4楼2014-12-17 11:00:50
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