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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 考马斯亮蓝法检测出蛋白质含量很低，而用凯氏定氮法测出总氮很高
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)

[交流] 考马斯亮蓝法检测出蛋白质含量很低，而用凯氏定氮法测出总氮很高

最近在检测玉米浸泡水中的蛋白质含量，发现用考马斯亮蓝法测出的蛋白质含量很低，在1g/L以下，而用凯氏定氮法测出含量在100g/L以上。是否说明其中大部分都是小分子的多肽和氨基酸，大分子蛋白含量很少？考马斯亮蓝法的局限是否在这里？对于小肽无法检测？
这时候是否可以用三氯乙酸处理后取上清直接用茚三酮的方法测氨基酸含量，然后用凯氏定氮法测总氮量（即小肽和氨基酸的总量），两者的差值极为小肽含量？
但是问题采用茚三酮的方法时候，是否小肽也会和茚三酮反应，从而影响导致测的氨基酸含量不准？
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1楼 2014-12-16 20:08:58
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zj风之子

木虫 (小有名气)
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恒河夕阳梦: 金币+1 2014-12-20 12:20:24
考马斯亮蓝和folin-酚法等测蛋白的方法都只能测可溶性蛋白，凯氏定氮测定是粗蛋白含量（总氮），玉米中的蛋白，主要存在于胚乳当中，主要以醇溶蛋白和谷蛋白居多，这些都是非水溶性的蛋白，而且小分子肽一般通过对大分子蛋白质降解得到，用水浸泡得到小分子肽这种说法是不科学的。
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无
5楼2014-12-18 21:16:24
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99503102

版主 (著名写手)
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恒河夕阳梦: 金币+1 2014-12-17 15:55:01
不能说考马斯亮蓝法不能测小肽，两者的差异我觉得是在于凯氏定氮测的是氮元素，其中就包括非蛋白的含氮物质，是一个较为粗略的结果，其值肯定要大于只能测定可溶性蛋白的考马斯亮蓝法测得值。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-12-17 15:03:59
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qiuyuewne827

铁虫 (初入文坛)
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恒河夕阳梦: 金币+1 2014-12-20 12:20:14
考马斯亮蓝不适合测量小分子肽，通常为具有生物活性的，凯氏测定的是总氮量，包括非蛋白质氮，通过换算，计算出蛋白质，后者肯定比前者大啦！
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4楼2014-12-17 17:04:24
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qiuyuewne827 at 2014-12-17 17:04:24
考马斯亮蓝不适合测量小分子肽，通常为具有生物活性的，凯氏测定的是总氮量，包括非蛋白质氮，通过换算，计算出蛋白质，后者肯定比前者大啦！

比它大是肯定的。关键是大太多了，非蛋白质氮不应该有那么多，无机氮是很少的。而且液体澄清，离心过了
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6楼2014-12-20 12:23:37
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zj风之子

木虫 (小有名气)
★
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含氮量很高这个是不是你实验操作有些问题，可以重复一下实验，不用客气。
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无
13楼2014-12-30 21:35:27
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2014-12-17 15:03:59
不能说考马斯亮蓝法不能测小肽，两者的差异我觉得是在于凯氏定氮测的是氮元素，其中就包括非蛋白的含氮物质，是一个较为粗略的结果，其值肯定要大于只能测定可溶性蛋白的考马斯亮蓝法测得值。
...

这个我也清楚。首先其中的无机氮也是很少的，总氮太高。浸泡水其中非蛋白氮应该也不多。所以我在想是不是其中大部分是小肽或者氨基酸？不然考马斯亮蓝法检测出蛋白质含量这么少？
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3楼2014-12-17 15:56:41
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zj风之子 at 2014-12-18 21:16:24
考马斯亮蓝和folin-酚法等测蛋白的方法都只能测可溶性蛋白，凯氏定氮测定是粗蛋白含量（总氮），玉米中的蛋白，主要存在于胚乳当中，主要以醇溶蛋白和谷蛋白居多，这些都是非水溶性的蛋白，而且小分子肽一般通过对大 ...

样品经过了离心处理，没有不溶物。玉米中的醇溶性蛋白和谷蛋白还是存在于浸泡水中吗？其次，考马斯亮蓝法测定这两种蛋白质不行吗？
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7楼2014-12-20 12:25:21
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zj风之子

木虫 (小有名气)
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恒河夕阳梦: 金币+1 2014-12-21 23:07:05
引用回帖:
7楼: Originally posted by 恒河夕阳梦 at 2014-12-20 12:25:21
样品经过了离心处理，没有不溶物。玉米中的醇溶性蛋白和谷蛋白还是存在于浸泡水中吗？其次，考马斯亮蓝法测定这两种蛋白质不行吗？...

用考马斯亮蓝法只能测出一小部分可溶性的蛋白，而玉米中大部分的非水溶性性蛋白是测不出来的。
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无
8楼2014-12-21 13:05:39
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恒河夕阳梦

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zj风之子 at 2014-12-21 13:05:39
用考马斯亮蓝法只能测出一小部分可溶性的蛋白，而玉米中大部分的非水溶性性蛋白是测不出来的。...

那这些醇溶性的蛋白也能溶于水吗？
我测量的是水溶液中的蛋白质，溶液是澄清的。
其次，这个资料是哪里找的？能推荐给我吗？
多谢！
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9楼2014-12-21 23:08:57
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zj风之子

木虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by 恒河夕阳梦 at 2014-12-21 23:08:57
那这些醇溶性的蛋白也能溶于水吗？
我测量的是水溶液中的蛋白质，溶液是澄清的。
其次，这个资料是哪里找的？能推荐给我吗？
多谢！...

醇溶蛋白不溶于水。。可溶于50%~90%的乙醇溶液，你测量到的蛋白质是玉米中能够溶于水的那部分可溶性蛋白。资料很多，书籍、文献都有，具体的你可以到网上搜一下关于蛋白质方面的资料。
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无
10楼2014-12-23 13:31:11
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