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chenct002

金虫 (小有名气)

[求助] 丙酮沉淀蛋白后怎么溶解 已有5人参与

想请教各位,从细胞里面提取蛋白后,-20度丙酮沉淀蛋白,然后离心,请问离心的转速是不是不能太大?离心时间多久适宜?文献上是12000r,15min,我觉得这个是不是不行,离心太久后蛋白变成很硬的一团粘在EP管底部,怎么涡都涡不起来,超声2个小时也溶解不了?请问怎么解决?
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chenct002

金虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lwpeng at 2014-12-10 18:45:43
丙酮沉淀之后要清洗,否则本身就让蛋白变性。这个度确实不好掌握,只有自己具体体会:可以仔细观察沉淀的蛋白边缘还是变透明,但中央较厚部分还没有完全干时,进行溶解。...

请问是用100%乙醇清洗还是使用其他的溶剂?假如是使用乙醇清洗,请问具体怎么清洗?乙醇不会使蛋白变性吗?
11楼2014-12-10 22:14:39
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenct002: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-12-07 15:51:32
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:52:35
我做过从肝脏提取碱性磷酸酶,冷丙酮沉淀后,2000rpm离心5分钟,然后用tris缓冲液溶解的。
2楼2014-12-06 15:50:54
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guoliwang

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:52:43
chenct002: 金币+2, 有帮助 2014-12-07 15:53:09
转速和时间最初参考相应参考文献,也要根据自己的实验目的和结果调整。溶解液必须用你后续实验的溶液。
慎思明辨博学笃行
3楼2014-12-06 17:06:26
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lwpeng

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
chenct002(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-12-07 15:52:53
chenct002: 金币+5 2014-12-07 15:53:34
丙酮沉淀后用酒精清洗晾干的时候,不能让蛋白过度干燥,否则溶解是很困难的。
4楼2014-12-06 22:36:32
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