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关于胰岛素体内样品处理方法已有2人参与
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以下是我在文献中看到的胰岛素体内样品处理方法： A volume of 10ml of plasma sample was pipetted into a 5-ml test tube and diluted to 1 ml with PBS (pH 7.4) to permit sample to be analyzed under the sample conditions. The sample was extracted with 1ml dichloromethane by rotating for 5 min. The tube was centrifuged briefly to separate the layers and then immersed in dry-ice bath. The supernatant layer was decanted and 0.8 ml of the organic phase was transferred toanother tube. To the organic extract 130ml of 0.05 N HCl was added for back-extraction. After shaking and centrifugation the organic layer was evaporated under a stream of nitrogen and a 100-ml aliquot was injected into the HPLC. 取10μl血浆样品加入到5mlEP管中，再加入1mlPBS（7.4），加入1ml二氯甲烷萃取，涡旋5min，简单的离心分层，置于干冰浴中，除去上清液，取0.8ml有机层转移至另一EP管，加入130μl 0.05N HCl反萃取有机层，涡旋和离心后，有机层在氮气流下吹干，取100μl等分样品进样。 问题：1.在该处理方法中，加入7.4PBS、二氯甲烷、0.05HCL的作用分别是什么？ 2.这样提取分离的原理是什么？是根据蛋白质等电点吗还是其他什么？ 3.这样的提取分离方法能将胰岛素与血浆蛋白分离开吗？ 4.是直接吹有机层吗？吹的程度怎么掌握？ 请各位大神给予指点！！！ |
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